[发明专利]一种检测血清肺炎支原体特异性IgE的试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测血清肺炎支原体特异性IgE的试剂盒。所述试剂盒由包被抗原、固相载体、阳性质控品、阴性质控品、酶标记抗人IgE抗体、抗原稀释液、样品稀释缓冲液、检测抗体稀释缓冲液、洗涤液，显色液、终止液组成。本发明所属试剂盒具有灵敏度高，特异性强，检测成本低，样品用量少，操作简便，实验和结果判断不需要特殊仪器设备等优点，为临床提供一种检测肺炎支原体IgE的检测试剂盒，并探讨其在肺炎支原体肺炎合并的哮喘诊断中的应用。

技术领域

本发明涉及体外诊断免疫检测领域，具体地涉及一种检测血清肺炎支原体特异性IgE 的试剂盒，是一种快速简便地定性和半定量分析伴有肺炎支原体肺炎患儿血清中特异性IgE 水平的检测试剂盒和制备方法。

技术背景

哮喘是最常见的慢性非传染性疾病之一，世界卫生组织2014年全球哮喘报告估计，目前全世界有3.34亿人患有哮喘。全球明确诊断的哮喘患病率约为4.3％(95％CI 4.2-4.4)，给家庭和社会带来了沉重的负担。近年许多研究成果表明,肺炎支原体(MP)感染与哮喘的发生密切相关,且与哮喘的发展及恶化皆有密切的关系。我们都知道儿童是肺炎支原体最为易感的群体之一，中国台湾学者基于岛内医疗保险的大数据分析，得出结论儿童时期有肺炎支原体感染史的人群与未发生过肺炎支原体感染的人群相比，其后患哮喘的校正危险比为3.35(95％ CI,2.71-4.15)。为了评估两者之间的关系，我们进行了一些前瞻性的研究，发现151例2-16 岁首次哮喘发作的患儿中急性MP感染78例(52％)，206例既往诊断哮喘并急性发作的患儿中急性MP感染43例(21％)，而稳定期哮喘和健康人群肺炎支原体感染率仅为5％和4％，见图1A。由此可见，肺炎支原体感染与哮喘的发生和发作存在一定的联系。在另一项前瞻性研究中，我们发现在118例携带MP的哮喘患儿中77例哮喘反复发作，发生率为65％，而相对的108例无MP携带的哮喘患儿中仅有17例哮喘反复发作，发生率仅为16％，见图1B。由此推测，MP慢性感染可能是哮喘患儿反复发作的原因之一。

肺炎支原体导致哮喘的病理生理机制尚不完全清楚。现有的研究认为肺炎支原体感染引起的I型超敏反应在哮喘的发生中起作用。我们前期的实验研究表明肺炎支原体感染会造成感染者体内Th1/Th2细胞发生失衡，使得Th0细胞向Th2细胞过度分化，引起B细胞发生抗体类别转换，产生更多的IgE，从而介导哮喘的发生。另外，我们实验结果表明许多MP肺炎(MPP)患者的血清总IgE水平升高，我们进一步证明了这部分患儿血清中升高的IgE 所对应的过敏原为肺炎支原体组分。具体实验如下：将提取肺炎支原体菌体蛋白点在纤维素膜上，加入MP肺炎患者血清进行孵育、清洗后加抗IgE抗体的二抗，如血清中含有抗MP 的IgE抗体，则出现阳性条带(图2A)，如血清中不含有抗MP的IgE抗体，则不出现阳性条带(图2B)。结果发现，35％的MP肺炎患儿血清中有抗MP的IgE抗体。

基于以上基础研究，我们建立了一种MP特异性IgE斑点酶免疫检测试剂盒及其制备方法，为临床上MPP合并哮喘早期诊断提供实验室依据。

发明内容

本申请的目的是提供一种检测血清肺炎支原体(MP)特异性IgE的试剂盒，主要包括包被抗原、固相载体、阳性质控品、阴性质控品、酶标记抗人IgE抗体、抗原稀释液、样品稀释缓冲液、标记抗体稀释缓冲液、洗涤液、底物显色剂、终止液，信号检测方法为光显色法。

所述包被抗原为肺炎支原体菌体总蛋白。通过培养肺炎支原体并提取定量菌体蛋白作为抗原蛋白。

所述阳性质控品为肺炎支原体特异性IgE浓度较高的MPP患者的混合血清并定量作为阳性质控品，所述阴性质控品为正常人血清或胎牛血清。

所述酶标记抗人IgE抗体为辣根过氧化物酶标记羊抗人IgE。

所述包被抗原(肺炎支原体菌体总蛋白)固定于固相载体上，优选的固相载体包括：硝酸纤维素膜。