[发明专利]一种识别N6亚型禽流感病毒神经氨酸酶蛋白的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种识别N6亚型禽流感病毒神经氨酸酶蛋白的单克隆抗体及其应用。所述的单克隆抗体由保藏编号为CGMCC No.18900的杂交瘤细胞株3H7分泌产生。实验证明，本发明得到的单克隆抗体3H7能够与N6亚型禽流感病毒发生特异性结合，且能够与15株不同进化分支的N6亚型禽流感病毒结合，表明3H7具有良好的广谱性。本发明利用该单克隆抗体较好的广谱性及特异性建立了一种用于N6亚型禽流感病毒神经氨酸酶蛋白抗体阻断ELISA检测试剂盒及其检测方法。实验证明，该方法敏感性高，重复性好，可以用于临床血清样品中N6亚型禽流感病毒神经氨酸酶蛋白抗体水平的检测，具有良好的开发前景。

技术领域

本发明涉及一种可分泌N6亚型禽流感病毒神经氨酸酶蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，同时涉及该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体及其应用。本发明属于生物技术领域。

背景技术

禽流感(AI)是由正粘病毒科A型流感病毒引起的禽类急性传染病，被世界动物卫生组织列为A类烈性传染病。禽流感病毒(AIV)是一种单股负链分节段的RNA病毒，亚型众多，可根据其表面糖蛋白血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的抗原差异分为16种不同的HA亚型和9种不同的NA亚型，此外，还在蝙蝠体内分离到H17N10和H18N11亚型流感病毒。

NA是由片段6编码的一种II型糖蛋白，NA蛋白在结构上形成一个异源四聚体，每个NA蛋白单体都是由一段氨基端短的胞质区，疏水的跨膜区，茎部区和球状的头部区组成。NA蛋白具有神经氨酸酶活性，在病毒感染的后期，可以切割宿主细胞表面以及新生病毒粒子表面的唾液酸，进而促进新形成病毒粒子的释放和扩散，阻止新生病毒粒子在细胞表面的聚积。

N6是当前国内流行禽流感病毒的主要NA亚型之一，其中以H5N6和H6N6亚型组合最为常见。H5N6亚型禽流感病毒不仅对家禽养殖业危害严重，同时还可以跨越种间屏障感染人类，截止2019年8月8日，已有22例人感染H5N6亚型禽流感病毒。此外，也有H6N6亚型禽流感病毒跨越种间屏障感染猪的报道。因此，加强对N6亚型禽流感病毒的监测具有重要的公共卫生学意义。目前，WHO推荐使用的NA亚型检测方法为神经氨酸酶抑制实验，但是该方法实验周期长，并且实验试剂亚砷酸钠为剧毒试剂，所以该方法很难在临床上推广使用。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种能够稳定分泌具有广谱性抗N6亚型禽流感病毒神经氨酸酶蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

本发明的目的之二是提供一种由上述杂交瘤细胞株所分泌的具有广谱性抗N6亚型禽流感病毒神经氨酸酶蛋白的单克隆抗体。

本发明的目的之三是将上述单克隆抗体应用于N6亚型禽流感的诊断和治疗。

本发明达到上述目的是通过以下技术方案实现的：

本发明首先选取3株位于不同进化分支的N6亚型禽流感病毒，将灭活后病毒依次间隔14天免疫6周龄BALB/c雌性小鼠，取免疫后小鼠脾脏与SP2/0细胞融合。利用间接免疫荧光方法筛选到1株能够稳定分泌具有广谱性抗N6亚型禽流感病毒神经氨酸酶蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株，命名为3H7，分类命名为杂交瘤细胞，该细胞株保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.18900，保藏时间为2019年12月4日。