[发明专利]中华绒螯蟹5-HT2B受体基因及其克隆方法

说明书

本发明公开了一种中华绒螯蟹5‑HT2B受体基因及其克隆方法，属于基因工程领域。本发明根据5‑HT2B受体的表达序列标签设计引物，通过反转录获得3’和5’末端侧翼片段，并与5‑HT2B受体的表达序列标签进行拼接后可获得中华绒螯蟹5‑HT2B基因的全长序列。对于5‑HT2B受体基因的研究，将为蟹类行为、肠道生理及5‑HT受体功能的研究奠定理论基础，也将为蟹品质、饲料节约、减少由饲料造成的环境污染等应用方向提供理论支持。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种中华绒螯蟹5-HT2B受体基因及其克隆方法。

背景技术

中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis)又称河蟹，是我国重要的经济淡水养殖蟹类，属甲壳纲(Crustacea)，十足目(Decapoda)，在我国水产养殖业中占据重要位置。河蟹生性好斗，打斗行为使其种内互相残杀现象极其严重，断肢和再生时有发生。打斗会造成断肢蟹的出现，进而影响存活、生长和品质，再生会增加养殖成本，减少再生蟹的品质。

5-羟色胺(5-HT)在行为学中的作用已在哺乳和两栖类动物中已广泛关注(MikóZ,2017；Hernández-Plata,2015)，且与脑等中枢神经调控密切相关。其需要与其受体结合后才能发挥作用。已发现5-HT在龙虾的打斗或抑郁行为中有重要作用(Huber,2005；Moore,2007)。本课题组也已发现其在中华绒螯蟹打斗行为中起着重要的作用(Yang,2018；Pang,2019)，但并不清楚中枢神经系统如脑和胸神经节，在5-HT介导的行为学中的作用如何，而且至今有关蟹类5-HT多种受体的结构与功能仍不清楚。此外，5-HT能促进肠道运动，表现为食物在肠道中的存留时间减少。说明5-HT参与了食物在肠道中的运动。肠道动力直接与投喂频率及量相关，结合生理水平的基础研究，进行科学投喂势必减少饲料浪费及由饲料造成的环境污染。也已证明，5-HT2B受体是GPCR家族中的重要一员，参与体内的多种生理和病理活动。大量的研究表明，5-HT2B受体的选择性拮抗剂，在人类医学中发挥着重要的作用，对肺动脉高血压、偏头痛、肠易激综合症和肝纤维化等相关疾病的治疗方面有潜在的临床应用价值。在蟹类的养殖中肝胰腺是其营养、生殖和发育调节的重要器官，也是疾病损伤最主要的器官之一。因此，本发明对于5-HT2B受体结构的研究，是对其功能研究的基础，对于此基因的研究，将为蟹类行为、肠道生理及5-HT受体功能的研究奠定理论基础，也将为蟹品质、饲料节约、减少由饲料造成的环境污染等应用方向提供理论支持。

本发明存在以下难点：(1)由于蟹没有基因组的参考序列，也没有基因组表达序列，对于此物种的相应受体克隆难度高；(2)对于相近物种也存在基因组差异性大，多态性高的问题；(3)该基因的表达量较低；(4)该基因的GC含量高，GC含量60％。

发明内容

针对上述技术难题，本发明提供一种克隆方法，以获得中华绒螯蟹5-HT2B的受体基因，内容如下：

一种中华绒螯蟹5-HT2B受体基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

SEQ ID NO:1中华绒螯蟹5-HT2B基因核酸序列(serotonin 2b receptor)

1 ggggattgcaattgcgagtgaaacatatattgaaaaaacacccgcacgtgcgcactgaac 60

61 ggaaacgaaacgaaccgaacgaacatcaaagacaatgcggaataataatgaaacgcacgt 120

121 cgtgaaaatgaactccgaactcacgccaaatactaaaaaggaaaaccatacgtgcgggaa 180

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