[发明专利]一种具有诱导肿瘤细胞铁死亡效应的无定型碳酸钙复合纳米药物及其制备方法

权利要求书

1.一种具有诱导肿瘤细胞铁死亡效应的无定型碳酸钙复合纳米药物的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)制备接枝叶酸的炔基化二代聚酰胺-胺型树枝状高分子

将叶酸、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺加入N,N-二甲基甲酰胺中，活化0.5-2h后再加入炔基化二代聚酰胺-胺型树枝状高分子，室温下搅拌反应24h后透析，制得接枝叶酸的炔基化二代聚酰胺-胺型树枝状高分子；

(2)制备聚乙二醇单甲醚接枝基质金属蛋白酶-2响应肽的炔基化二代酰胺-胺型树枝状高分子

首先将叠氮化聚乙二醇单甲醚、炔基化基质金属蛋白酶-2响应肽、五水硫酸铜和抗坏血酸加入N,N-二甲基甲酰胺中，室温下保护气氛中搅拌反应24h后透析，制得聚乙二醇单甲醚接枝基质金属蛋白酶-2响应肽；然后将所述聚乙二醇单甲醚接枝基质金属蛋白酶-2响应肽溶于无水二氯甲烷中，加入二碳酸二叔丁酯、三乙胺后室温下搅拌反应12-24h后透析，制得聚乙二醇单甲醚接枝叔丁基脂保护的基质金属蛋白酶-2响应肽；最后将所述聚乙二醇单甲醚接枝叔丁基脂保护的基质金属蛋白酶-2响应肽、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺加入N,N-二甲基甲酰胺中，活化0.5-2h后再加入炔基化二代聚酰胺-胺型树枝状高分子，室温下搅拌反应24h后旋干，将产物溶于三氟乙酸溶液中，室温下搅拌反应12-24h后透析，制得聚乙二醇单甲醚接枝基质金属蛋白酶-2响应肽的炔基化二代酰胺-胺型树枝状高分子；

(3)制备载阿霉素、二价铁离子的无定型碳酸钙复合纳米颗粒

将氯化钙、阿霉素盐酸溶液、无水氯化亚铁加入无水乙醇中，混匀后置于带有若干个出气孔的容器中，然后置于装有碳酸氢铵的干燥器中，室温下反应2-3d后离心取沉淀，将所述沉淀洗涤后，制得载阿霉素、二价铁离子的无定型碳酸钙复合纳米颗粒；

(4)制备表面修饰有硅层的载阿霉素、二价铁离子的无定型碳酸钙复合纳米颗粒

将步骤(3)中制备的载阿霉素、二价铁离子的无定型碳酸钙复合纳米颗粒分散于无水乙醇中，然后加入乙二胺四乙酸、氨水，以400-800rpm的速度搅拌15min后加入正硅酸乙酯，继续以400-800rpm的速度搅拌15min后再加入水，搅拌反应12-24h后离心取沉淀，将所述沉淀洗涤后，制得表面修饰有硅层的载阿霉素、二价铁离子的无定型碳酸钙复合纳米颗粒；

(5)制备具有诱导肿瘤细胞铁死亡效应的无定型碳酸钙复合纳米药物

将步骤(4)中制备的表面修饰有硅层的载阿霉素、二价铁离子的无定型碳酸钙复合纳米颗粒分散于无水甲苯中，然后加入3-氨丙基三甲氧基硅烷，60℃回流反应12-24h后离心取沉淀，将所述沉淀洗涤后，制得氨基化载阿霉素、二价铁离子的无定型碳酸钙复合纳米颗粒；将所述氨基化载阿霉素、二价铁离子的无定型碳酸钙复合纳米颗粒分散于无水乙醇中，再加入叠氮聚乙二醇对甲苯磺酰，45℃下搅拌反应12h后离心取沉淀，将所述沉淀洗涤后，制得叠氮化聚乙二醇修饰的载阿霉素、二价铁离子的无定型碳酸钙复合纳米颗粒；将所述叠氮化聚乙二醇修饰的载阿霉素、二价铁离子的无定型碳酸钙复合纳米颗粒、步骤(2)中制备的聚乙二醇单甲醚接枝基质金属蛋白酶-2响应肽的炔基化二代酰胺-胺型树枝状高分子，步骤(1)中制备的接枝叶酸的炔基化二代聚酰胺-胺型树枝状高分子、五水硫酸铜和抗坏血酸加入N,N-二甲基甲酰胺中，室温下保护气氛中搅拌反应24h后离心取沉淀，将所述沉淀洗涤后，制得具有诱导肿瘤细胞铁死亡效应的无定型碳酸钙复合纳米药物。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述叶酸、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺、N,N-二甲基甲酰胺和炔基化二代聚酰胺-胺型树枝状高分子的质量体积比为60:80:47:25:100，所述质量体积比的单位为mg:mg:mg:mL:mg。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述叠氮化聚乙二醇单甲醚、炔基化基质金属蛋白酶-2响应肽、五水硫酸铜、抗坏血酸和N,N-二甲基甲酰胺的质量体积比为250:47:15:30:50，所述质量体积比的单位为mg:mg:mg:mg:mL。