[发明专利]一种高效鸭坦布苏病毒病亚单位疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种高效鸭坦布苏病毒病亚单位疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)鸭坦布苏病毒E蛋白抗原表位的筛选：以鸭坦布苏病毒囊膜蛋白基因序列为基础，筛选出2段T细胞表位与8段B细胞表位；

2)多表位串联基因的构建与人工合成：以筛选出的2段T细胞表位与8段B细胞表位多肽氨基酸序列为依据，在两个不同表位间分别引入柔性氨基酸G1y-ser作为柔性肽，串联构成一个连续的开放阅读框，并在DNA序列的两端加NcoⅠ和XhoⅠ酶切位点，合成DNA基因，命名为TBE，将TBE基因连接至pMDl8-T中，命名为pMDl8-T-TBE；

3)重组质粒pFastHTA-TBE的构建：NcoⅠ和XhoⅠ分别对pMDl8-T-TBE、pFastHTA质粒进行双酶切，分别回收载体片段与目的基因片段，用T4 DNA连接酶将目的基因片段连接到杆状病毒表达载体pFastHTA上，然后转化至DH5α感受态细胞中，构建pFastHTA-TBE，将酶切鉴定正确的重组质粒测序；

4)重组穿梭载体rBacmid-TBE的构建：将pFastHTA-TBE转化DH10Bac感受态细胞，37℃培养24～48h，通过蓝白菌落筛选，并提取rBacmid-TBE，以M13通用引物进行PCR鉴定；

5)重组杆状病毒rBV-TBE的构建：将纯化的rBacmid-TBE，利用脂质体LipofectamineTM2000转染Sf9昆虫细胞，提取病毒DNA，PCR鉴定为阳性的重组病毒低剂量感染Sf9昆虫细胞，经2代扩大培养后收获培养上清液，即获得重组杆状病毒rBV-TBE，4℃避光保存。

2.一种高效鸭坦布苏病毒病亚单位疫苗，其特征在于，所述高效鸭坦布苏病毒病亚单位疫苗采用权利要求1所述方法制得。