[发明专利]一种大肠杆菌表达可溶性重组蛋白的高效培养基及其制备方法

权利要求书

1.一种大肠杆菌表达可溶性重组蛋白的高效培养基，其特征在于：

所述高效培养基选取M9培养基，添加山梨醇、乙醇、葡萄糖、蔗糖等基本成分，并辅以硫酸镁和氨苄青霉素，以IPTG为诱导剂，旨在调高外源蛋白的可溶性表达；

所述M9培养基的配比如下：

配置1L该M9培养基，取750ml无菌去离子水，该去离子水冷至50度或50度以下，加入：

5*M9盐溶液 200ml

1mol/L硫酸镁 2ml

适当碳源的20% 溶液 20ml

1mol/L氯化钙 0.1ml

灭菌的去离子水定容到 1000ml。

2.根据权利要求1所述的一种大肠杆菌表达可溶性重组蛋白的高效培养基，其特征在于：

所述5*M9盐溶液的配制方法如下：

SA1：按如下配比配制溶液：

Na2HPO4·7H2O 64g

KH2PO4 15g

NaCL 2.5g

NH4Cl 5.0g

用去离子水溶解上述盐，定容至终体积为1L；

SA2：将上述1L 5*M9盐溶液平均分装成5份，每份200ml，5份5*M9盐溶液均在15psi高压下蒸汽灭菌15min，得第一混合液。

3.根据权利要求2所述的一种大肠杆菌表达可溶性重组蛋白的高效培养基，其特征在于：

所述M9培养基的配制方法如下：

SB1：分别配置1mol/L硫酸镁、1mol/L氯化钙溶液，均高压灭菌；

SB2：取1份200ml的第一混合液，加入20%葡萄糖20ml，得第二混合液；

SB3：用无菌蒸馏水将上一步所得第二混合液稀释至980ml后，加入1mol/L硫酸镁2ml和1mol/L氯化钙0.1ml溶液，无菌蒸馏水定容至1L，用0.22微摩尔滤器过滤灭菌。