[发明专利]一种免疫增强剂及其在疫苗制备中的应用

说明书

本发明采用对PRRSV‑I和PRRSV‑II型病毒都具有中和活性的单克隆抗体5D9制作免疫增强剂，所形成的免疫复合物与佐剂联合免疫小鼠时，IFN‑γ分泌T细胞显著升高，提示在灭活病毒免疫过程中，PRRSV特异性抗体5D9与正常的水包油佐剂联合免疫可增强CTL反应。动物试验表明，本发明制备的免疫复合物的免疫保护率相比仅采用商业化佐剂ISA 206制备得到的疫苗以及商品化的弱毒疫苗能够达到更高的保护效力。

技术领域：

本发明属于生物领域，具体涉及一种免疫增强剂及其在疫苗制备中的应用，可以用于猪繁殖与呼吸综合征的治疗药物的开发。

背景技术：

疫苗主要可分为减毒活疫苗，灭活疫苗以及通过基因工程技术表达的蛋白亚单位疫苗。在以上的三种类型疫苗中，灭活疫苗及蛋白亚单位疫苗安全性最高，但由于免疫进入机体后无法增殖，因此难以有效刺激宿主免疫系统，往往需要多次免疫，并且刺激机体所产生的免疫反应主要以体液免疫应答为主（抗体），难以刺激机体产生细胞免疫应答（杀伤性T细胞，CTL），因此对于一些病毒性传染病，灭活疫苗或亚单位疫苗保护效果存在缺陷。

IgM为机体在感染时产生的第一种抗体类型，与其他类型的抗体不同，IgM为五聚体结构，因此具有独特的生物学活性。IgM可以结合补体C1通过经典途径来激活补体反应，刺激局部的天然免疫应答，同时IgM可以通过其恒定区（Fc）结合抗原提呈细胞（APC）表面的Fc受体，来促进APC的抗原加工提呈能力，促进适应性免疫应答（体液免疫应答，细胞免疫应答）的启动。而我们认为，通过使用特异性识别抗原的IgM与抗原结合成为“IgM-抗原”复合物来免疫动物，可以增强机体免疫系统对于抗原的适应性免疫应答。

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndromevirus，PRRSV）引起的以母猪流产和仔猪呼吸障碍为主要特征的病毒性传染病，并能引起严重的免疫抑制。该病毒已在全球猪群中广泛传播，给世界养猪业造成了巨大的经济损失，已成为全球规模化猪场的主要疫病之一，也是全球猪病控制上的一大难题。现有的PRRSV的防控主要依靠减毒活疫苗和灭活疫苗，现有的证据显示减毒活疫苗的在生产实践中尽快可诱导机体产生免疫保护，但被免疫动物排毒（疫苗毒株），在免疫猪群中长期存在，毒力返祖以及与野生流行毒株重组等缺点。另一方面，尽管灭活疫苗安全性较好，但由于灭活疫苗免疫动物后刺激适应性免疫应答较弱，因此难以形成有效保护，市场接受度不高。

发明内容：

为了解决现有PRRSV灭活疫苗存在的问题，本发明鉴定出一株PRRSV广谱中和抗体5D9，对于PRRSV-I型和PRRSV-II型病毒均具有较高的中和活性，进一步将其制备成免疫增强剂，用于PRRSV疫苗的制备，所述广谱中和抗体5D9与灭活PRRSV病毒进行结合形成“IgM-灭活病毒”免疫复合物，所述“IgM-灭活病毒”复合物型疫苗对于疫苗诱导的细胞免疫应答的提升作用。

为解决以上技术问题，本发明采用如下技术手段;

一种免疫增强剂，所述免疫增强剂包含PRRSV广谱中和抗体5D9，所述PRRSV广谱中和单克隆抗体5D9包括重链和轻链，其特征在于：

所述重链的氨基酸序列如SEQ ID No：1所示；

所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID No：2所示。

所述PRRSV广谱中和单克隆抗体5D9的编码DNA，包括重链和轻链，其特征在于：

所述重链的编码DNA序列如SEQ ID No：3所示；

所述轻链的编码DNA序列如SEQ ID No：4所示。

所述单克隆抗体5D9为IgM亚型。