[发明专利]一种嗜碱芽孢杆菌及其产生的碱性木聚糖酶和应用

权利要求书

1.一种嗜碱芽孢杆菌，其特征在于：名称为Bacillus sp.WMN1，于2020年1月3日保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2020007。

2.一种碱性木聚糖酶的制备方法，其特征在于：所述的碱性木聚糖酶按照下述方法制得：

(1)粗酶液的制备

将权利要求1所述的嗜碱芽孢杆菌Bacillus sp.WMN1在发酵培养基中进行液体发酵，高速冷冻离心，取上清液，过滤，即得粗酶液，用于离子交换层析；

(2)碱性木聚糖酶的分离纯化

(a)碱性木聚糖酶的阴离子交换层析

离子交换层析介质为DEAE Sepharose Fast Flow；缓冲液体系为pH8.0的Tris-HCl缓冲液，平衡液为pH8.0的Tris-HCl缓冲液，洗脱液为含NaCl pH8.0的Tris-HCl缓冲液；取60mL介质小心灌入规格为Φ1.6cm×40cm的层析柱中，使得凝胶均匀且无气泡；用3～5倍柱体积的平衡液进行平衡，待A280稳定后取粗酶液上样，穿透峰出现之后进行盐浓度梯度洗脱，分别收集不同盐浓度梯度洗脱出来的峰，检测各个峰的木聚糖酶酶活；使用10kDa的超滤管将具有酶活性峰的洗脱液进行浓缩脱盐，得到碱性木聚糖酶的酶液，即浓缩酶液；

(b)碱性木聚糖酶的凝胶过滤

使用预装柱superdex75将进行过阴离子交换层析的酶液再次进行分离；缓冲液体系为pH8.0的Tris-HCl缓冲液，用3～5倍体积缓冲液将A280基线冲洗至稳定状态后，取适量步骤(a)获得的浓缩酶液上样，再用1个体积将样品进行洗脱，并收集洗脱峰液，即纯酶液。

3.根据权利要求2所述的碱性木聚糖酶的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的液体发酵的条件为在37℃，200rpm的培养条件下发酵5d。

4.根据权利要求2所述的碱性木聚糖酶的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的高速冷冻离心的条件为于4℃，12000rpm高速冷冻离心25min。

5.根据权利要求2所述的碱性木聚糖酶的制备方法，其特征在于：

步骤(1)中所述的过滤为经0.45μm滤膜过滤。

6.权利要求1所述的嗜碱芽孢杆菌在造纸、洗涤工业中的应用。