[发明专利]一种红麻HcPDS基因VIGS沉默体系

权利要求书

1.一种红麻八氢番茄红素脱氢酶基因HcPDS，其特征在于：其全长基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种用于沉默如权利要求1所述红麻八氢番茄红素脱氢酶基因HcPDS的HcPDS基因特异性片段，其特征在于：所述HcPDS基因特异性片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

3.一种沉默如权利要求1所述红麻八氢番茄红素脱氢酶基因HcPDS的VIGS载体，其特征在于：利用gateway重组克隆技术将HcPDS基因特异性片段连接至VIGS病毒骨架载体pTRV2中，构建获得重组病毒载体pTRV2-HcPDS；所述HcPDS基因特异性片段的核苷酸序列如SEQID NO.4所示。

4.一种如权利要求1所述红麻八氢番茄红素脱氢酶基因HcPDS的VIGS沉默体系的构建方法，包括以下步骤：

(1)通过冻融法将重组病毒载体pTRV2- HcPDS转化到农杆菌GV3101感受态细胞，PCR鉴定阳性；所述重组病毒载体pTRV2-HcPDS是利用gateway重组克隆技术将HcPDS基因特异性片段连接至VIGS病毒骨架载体pTRV2中，构建获得重组病毒载体pTRV2-HcPDS；所述HcPDS基因特异性片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

(2)将转化后的阳性农杆菌菌液与pTRV1菌液按菌液体积比1:1混合制成混合菌液；

(3)通过浸泡法将红麻种子在步骤（2）的混合菌液中浸泡24h；

(4)检测：将浸泡后的种子播种后置于培养温度为22℃，光照/黑暗=14h/10h的条件下生长，观察新长出的红麻叶片的表型变化，并检测叶片中八氢番茄红素脱氢酶基因HcPDS的表达情况，即构建得到红麻八氢番茄红素脱氢酶基因HcPDS沉默体系。

5.如权利要求2所述的HcPDS基因特异性片段在沉默红麻八氢番茄红素脱氢酶基因HcPDS中的应用；所述红麻八氢番茄红素脱氢酶基因HcPDS的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

6.如权利要求3所述的一种沉默红麻八氢番茄红素脱氢酶HcPDS基因的VIGS载体在沉默红麻八氢番茄红素脱氢酶基因HcPDS中的应用；所述红麻八氢番茄红素脱氢酶基因HcPDS的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

7.利用权利要求4所述的构建方法获得的沉默体系在沉默红麻八氢番茄红素脱氢酶基因HcPDS中的应用；所述红麻八氢番茄红素脱氢酶基因HcPDS的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。