[发明专利]一种提高外源碱性蛋白酶表达量的信号肽突变体及其构建方法与用途有效
| 申请号： | 202010074806.0 | 申请日： | 2020-01-22 |
| 公开（公告）号： | CN111153968B | 公开（公告）日： | 2022-04-08 |
| 发明（设计）人： | 路福平;李玉;彭冲;陈雪佳;王兴吉;刘逸寒;王克芬;张会图;刘文龙;刘夫锋;张杰;佟新伟 | 申请（专利权）人： | 天津科技大学;山东隆科特酶制剂有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/32 | 分类号： | C07K14/32;C12N15/31;C12N1/21;C12N9/56;C12R1/125 |
| 代理公司： | 北京瑞盛铭杰知识产权代理事务所(普通合伙) 11617 | 代理人： | 张倩 |
| 地址： | 300457 天津市滨*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 碱性 蛋白酶 表达 信号肽 突变体 及其 构建 方法 用途 | ||
1.一种提高外源碱性蛋白酶表达量的信号肽突变体，其特征在于：所述信号肽突变体是在如序列SEQ ID NO：7所示的原始氨基酸序列的基础上，将其C端编码最后三位氨基酸突变为AHA。
2.编码权利要求1所述信号肽突变体的基因。
3.权利要求1所述信号肽突变体在提高外源碱性蛋白酶表达中的用途。
4.如权利要求3所述的用途，其特征在于：所述碱性蛋白酶的基因的核苷酸序列如SEQID NO：11所示。
5.一种重组载体，其特征在于：含有权利要求1所述信号肽突变体的编码基因。
6.一种宿主细胞，其特征在于：含有权利要求1所述信号肽突变体的编码基因或权利要求5所述重组载体。
7.权利要求6所述宿主细胞的构建方法，其特征在于：构建包含权利要求1所述信号肽突变体的编码基因和碱性蛋白酶基因的重组载体，将所述重组载体转入宿主细胞中，经过筛选得到阳性转化子。
8.一种碱性蛋白酶的生产方法，其特征在于：步骤如下：
将含有权利要求1所述信号肽突变体和碱性蛋白酶基因的基因工程菌经活化后以1.5-2.5%的接种量转接于发酵培养基中，于34-40℃、215-225 r/min发酵培养15-49h；
所述发酵培养基组成为：玉米粉60-70g/L，豆饼粉30-50 g/L，磷酸氢二钠2-8 g/L，磷酸二氢钾0.1-0.6 g/L，高温淀粉酶0.5-1.0 g/L，余量为水。
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