[发明专利]用于检测同种异体的、或供者特异性的非HLA抗体的方法

说明书

本发明公开了用于检测同种异体的、或供者特异性的非HLA抗体的方法，通过对用于检测抗体的混合抗原原料中预先特异性地清除HLA类抗原的实验设计，检测移植物受者样本中所有已知或未知的同种异体的、或供者特异性的非HLA类抗原的相应抗体。本检测方法既解决了目前以细胞为基础的同种异体的、或供者特异性的抗体检测技术中，由于HLA类抗原和非HLA类抗原在靶细胞的共表达导致无法直接区分HLA和非HLA抗体的缺点；也解决了以纯化抗原为基础的抗体检测技术中，纯化的HLA抗原只能检出相应的HLA抗体、纯化的特定非HLA抗原只检测特定非HLA抗体的缺点。

技术领域

本发明属于抗体检测技术领域，涉及用于检测同种异体的、或供者特异性的非HLA抗体的方法。

背景技术

在器官、组织和非自体的干细胞移植中，移植物受者产生的针对潜在的同种异体供者移植物抗原的抗体被称为同种异体抗体(alloantibody，AlloAb)；而对于确定的移植供者和受者的组合而言，移植物受者产生的针对供者移植物抗原的同种异体抗体则被定义为供者特异性抗体(Donor Specific Antibody，DSA)。DSA已被临床确认是导致抗体介导的排斥反应(Antibody-Mediated Rejection，AMR)的主要原因，并作为确诊AMR的必检指标被写入了移植排斥反应国际诊断标准。

人类白细胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)是最早被发现的、具有人群多态性的移植排斥相关抗原，近年来，随着HLA分子克隆技术和蛋白生化技术在移植研究中的广泛应用，HLA特异性的抗体和AMR相关关系的研究是近20年来学术界的热点课题。在HLA-AMR的深入研究中，人们逐渐发现HLA抗体并不能解释所有的AMR的发生，有很多病理上符合AMR诊断的形态学变化的病例中并无法找到任何HLA的抗体的存在。反复被证实的这种临床现象提醒移植免疫学的研究者们在当今过度强调HLA抗体和AMR的关联性的氛围中，我们需要重新思考“非HLA抗体”在AMR中的作用。另外，根据国际上最大的器官移植数据库(美国UNOS)的移植人群数据分析所得结果显示，在所有HLA无错配，也就是供受者之间HLA类型完全一致的情况下进行的器官移植，仍然有很高比例的移植器官最终失去功能。尽管不能排除部分病人可能存在其他非免疫因素(如顽固性感染等)引起的器官失功，但这样的结果给非HLA类抗原引起的免疫排斥反应的存在提供了大数据库资料的支持(Lancet 2005；365:1570–76；Current Opinion in Immunology 2005,17:541–545)。基于以上事实，“如何发现非HLA的其他移植相关抗原、如何检测非HLA类抗原的抗体”在确诊移植病人排斥反应的病因和确定相应的治疗措施时就变得尤为重要。

从理论上来说，如果我们要检测非HLA类抗体，我们需要知道除了HLA之外到底还有哪些非HLA抗原的存在，在这个前提下，我们可以通过表达、纯化所有这些非HLA类的抗原，然后通过免疫学的抗原抗体结合反应机理，检测移植病人体内针对不同非HLA类抗原的相应抗体。遗憾的是，在多年的移植免疫学的研究中非HLA类抗原的发现非常有限的，其中相对比较突出的一类抗原是MIC(major histocompatibility complex class I chain-related gene)基因所编码的蛋白抗原。然而，事实证明利用MIC蛋白抗原检测到的相应抗体还远不能解释所有非HLA抗体介导的排斥反应。那么，在目前无法完全确认所有非HLA抗原的实际情况下，我们难道就不能发现移植病人体内存在非HLA抗体吗？