[发明专利]脱细胞细胞外基质及其制备方法和生物墨水

权利要求书

1.一种脱细胞细胞外基质的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

提供生物组织碎块；

对所述组织碎块进行无菌处理；

将无菌的组织碎块经湿法粉碎制成悬浮浆料；

将所述悬浮浆料进行差速离心处理，获得脱细胞细胞外基质dECM；

将所述dECM制成混悬液，经无菌超声粉碎处理，获得具有目标颗粒粒径的dECM。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，采用间歇脉冲模式对所述dECM进行所述无菌超声粉碎处理，其中，超声振幅为65％～75％，处理时间为80s～120s，间歇脉冲模式为：脉冲时间为3s～7s，间歇时间为3s～7s；

进一步地，所述超声振幅为70％，所述处理时间为90s，所述脉冲时间为5s，所述间歇时间为5s。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述超声粉碎处理在周围温度为0℃～5℃条件下进行。

4.根据权利要求1-3任一项所述的制备方法，其特征在于，所述混悬液的浓度为3g/100mL～5g/100mL。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述悬浮浆料的浓度为1g/100mL～3g/100mL，所述差速离心处理包括：

将所述悬浮浆料在20℃～25℃下以1200rpm～1500rpm离心3min～5min，获得第一上清液；

将所述第一上清液在20℃～25℃下以1800rpm～2000rpm离心10min～15min，获得第二上清液；

将所述第二上清液在0℃～4℃下以5000rpm～6000rpm离心15min～20min，获得第三上清液；

将所述第三上清液在0℃～4℃下以9000rpm～10000rpm离心25min～30min，获得沉淀；

将所述沉淀制成悬浮液，在0℃～4℃下以9000rpm～10000rpm对所述沉淀离心处理3～4次，每次离心处理的时间为25min～30min。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述无菌处理包括：

使用过氧化氢溶液对所述组织碎块漂洗3～4次，每次5min～8min；

使用无菌的蒸馏水和/或PBS对所述组织碎块漂洗3～4次，每次5min～8min。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述生物组织碎块包括半月板组织碎块，所述dECM包括脱细胞半月板细胞外基质dMECM。

8.一种脱细胞细胞外基质，其特征在于，所述脱细胞细胞外基质是通过如权利要求1-7任一项所述的制备方法制得的。

9.一种生物墨水，其特征在于，所述生物墨水包含如权利要求8所述的dECM。

10.根据权利要求9所述的生物墨水，其特征在于，所述生物墨水包含水凝胶材料和所述dECM，所述水凝胶材料包括甲基丙烯酰胺基明胶GelMA、透明质酸HA和藻酸盐中的一种或多种。