[发明专利]可用于九色荧光STR分型的荧光染料、特异性扩增引物对和分型方法

说明书

本发明公开可用于九色荧光STR分型的荧光染料、特异性扩增引物对和分型方法，包括9种荧光染料，分别为FAM、TET、HEX、NED、ET598、ET618、ET635、ET650和ET680；8个荧光染料FAM、TET、HEX、NED、ET598、ET618、ET635和ET650对41个常染色体STR基因座和1个性别决定基因座Amel的扩增引物进行荧光标记；ET680用于标记内标。本发明的分型方法灵敏度高、结果稳定、图谱完整清晰，重复检测结果无明显差异；stutter峰面积比不超过10％，峰高比不超过15％，具有良好的系统重复性，42个基因座复合扩增体系检测均能得到准确分型结果。

技术领域

本发明涉及荧光STR分型技术领域。具体地说是可用于九色荧光STR分 型的荧光染料、特异性扩增引物对和分型方法。

背景技术

目前，市售DNA检验试剂盒最多为六色荧光，如申请人的在先研究如中 国专利文献CN107254516，对24个常染色基因座和1个性别决定基因座在 内的共计25个基因座进行荧光STR分型。

最先进的DNA检验试剂，常染色体最多能同时扩增检测27个基因座， Y染色体可达到38个，受限于可用荧光染料种类和引物设计等因素，限制 了试剂盒基因座的检测数量。对于微量降解检材、复杂亲缘关系鉴定还需要 加做试剂盒检验。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种可用于九色荧光STR分 型的荧光染料、特异性扩增引物对和荧光STR分型方法，打破现有检测系统 荧光数量和基因座数目的限制，通过一次扩增可以获得41个常染色体基因 座的分型信息，可有效的提高系统检测效能。

为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：

可用于九色荧光STR分型的荧光染料，包括9种荧光染料，分别为FAM、 TET、HEX、NED、ET598、ET618、ET635、ET650和ET680；其中，8个荧光染 料FAM、TET、HEX、NED、ET598、ET618、ET635和ET650对41个常染色体STR基因座和1个性别决定基因座Amel的扩增引物进行荧光标记；ET680用 于标记内标。

可用于九色荧光STR分型的特异性扩增引物对，包括42个基因座对应的 特异性扩增引物对，其序列分别为序列表中SEQ ID No.1至SEQ ID No.84的 核苷酸序列。

九色荧光STR分型方法，包括如下步骤：

(1)荧光体系的构建：采用8种不同的荧光染料标记42个基因座 的扩增引物，并采用ET680用于标记内标；

(2)复合扩增体系的构建：使用与42个基因座对应的特异性扩增 荧光引物序列对42个基因座进行扩增，获得扩增产物；

(3)对PCR扩增产物进行STR基因座分型。

本发明的技术方案取得了如下有益的技术效果：

首次提出了九色荧光复合扩增技术，目前尚无相关文献及专利。本发明 可一次同时扩增检测42个基因座，为同类产品中包含常染色体基因座数量 最多的试剂盒。