[发明专利]一种植物作为宿主表达病毒疫苗的方法

权利要求书

1.一种植物作为宿主表达新型病毒2019-nCoV疫苗的方法，其特征在于，包括：

S1、选取植物器官；

S2、构建表达载体；

S3、将所述的表达载体转化到农杆菌中；

S4、通过所述农杆菌介导真空渗透入植物组织；

S5、提取、分离蛋白质，获得病毒疫苗。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中所述植物器官包括生菜、烟草、白菜、水稻、玉米、大豆或小麦的叶片、种子、根茎或整株植物。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2中的表达载体包括：CTB、新型病毒2019-nCoV Spike receptor binding domain(RBD)、Fc以及载体。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述载体为双元植物载体。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤S2构建表达载体包括：

S2.1、将所述CTB以及所述RBD融合为一个蛋白，获得CTB-RBD疫苗蛋白；

S2.2、将所述CTB-RBD疫苗蛋白的密码子优化为植物偏好的密码子，获得CTB-RBD的优化序列；

S2.3、将所述CTB-RBD的优化序列5’末端加入Kpnl限制性酶切位点，在3’末端加入Sacl和Pacl位点，生成pCTB-RBD载体；

S2.4、通过Kpnl/Sacl获得基因片段CTB-RBD，并克隆到植物表达载体pCam35S，获得瞬时表达载体p35S-CTB-RBD。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤S2构建表达载体包括：

S2.1、将所述RBD以及所述Fc融合为一个蛋白，获得RBD-Fc疫苗蛋白；

S2.2、将所述RBD-Fc疫苗蛋白的密码子优化为植物偏好的密码子，获得RBD-Fc的优化序列；

S2.3、将所述RBD-Fc的优化序列5’末端加入Kpnl限制性酶切位点，在3’末端加入Sacl和Pacl位点，生成pRBD-Fc载体；

S2.4、通过Kpnl/Sacl获得基因片段RBD-Fc，并克隆到植物表达载体pCam35S，获得瞬时表达载体p35S-RBD-Fc。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤S2.2中所述CTB-RBD的优化序列包括CTB-RBD密码子优化的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示和CTB-RBD的氨基酸序列如SEQ IDNo.2所示。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤S2.2中所述RBD-Fc的优化序列包括RBD-Fc密码子优化的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示和RBD-Fc的氨基酸序列如SEQ IDNo.4所示。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S4通过农杆菌介导真空渗透包括：

S4.1、抽真空25～45s；

S4.2、保持真空-95kPa压力，30～60s；

S4.3、释放压力使得渗透液渗入所述植物组织；

重复上述步骤2～3次，避光处理4d。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述农杆菌为根癌土壤杆菌GV3101。