[发明专利]基于杂交链式反应的荧光DNA传感器及E542K基因检测方法

权利要求书

1.一种基于杂交链式反应的荧光DNA传感器，其特征在于，包括引发链、第一发夹探针及第二发夹探针，所述第一发夹探针的两端分别标记有荧光基团及相应的荧光猝灭基团，所述第二发夹探针的两端分别标记有荧光基团及相应的荧光猝灭基团，所述荧光基团为6-羧基荧光素，所述荧光猝灭基团为黑洞猝灭基团，所述第一发夹探针包括特异性识别E542K基因的碱基序列，所述第一发夹探针的碱基序列为5’-BHQ1-AAAATCACTAAGCAGGCAAAGTCCTGCTTAGTGATTTTAGAGAG-FAM-3’，所述第二发夹探针包括与所述第一发夹探针互补的碱基序列，所述第二发夹探针的碱基序列为5’-FAM-ACTTTGCCTGCTTAGTGATTTTCTCTCTAAAATCACTAAGCAGG-BHQ1-3’，所述引发链为E542K基因，所述引发链可与所述第一发夹探针结合，打开所述第一发夹探针的发夹结构，使所述第一发夹探针与所述第二发夹探针结合，激活杂交链式反应，形成长双链DNA，使所述长双链DNA荧光增强，从而定量检测所述E542K基因。

2.一种非疾病诊断目的的如权利要求1所述的基于杂交链式反应的荧光DNA传感器的E542K基因检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、取E542K基因、第一发夹探针与第二发夹探针首次开盖使用前先离心，分别将其溶于二次水中配成100μM的母液，再用缓冲液稀释成E542K基因溶液、第一发夹探针溶液和第二发夹探针溶液，4℃保存待用；

S2、将第一发夹探针溶液与第二发夹探针溶液分别加热并冷却至室温备用；

S3、将所述步骤S2中加热后的第一发夹探针溶液、第二发夹探针溶液与不同浓度的E542K基因溶液在缓冲液中混合反应，得到反应液，检测荧光信号强度。

3.根据权利要求2所述的基于杂交链式反应的荧光DNA传感器的E542K基因检测方法，其特征在于，所述缓冲液为SPSC缓冲液，pH为7.4。

4.根据权利要求2所述的基于杂交链式反应的荧光DNA传感器的E542K基因检测方法，其特征在于，在所述步骤S2中，加热反应温度为85℃~95℃，加热反应时间为5分钟~15分钟。

5.根据权利要求2所述的基于杂交链式反应的荧光DNA传感器的E542K基因检测方法，其特征在于，在所述步骤S3中，E542K基因溶液的浓度为10nM~1000nM，所述第一发夹探针溶液的浓度为1nM~1000nM，所述第二发夹探针溶液的浓度为1nM~1000nM。

6.根据权利要求2所述的基于杂交链式反应的荧光DNA传感器的E542K基因检测方法，其特征在于，在所述步骤S3中，混合反应温度为25℃~45℃，混合反应时间为3小时~7小时。