[发明专利]基于杂交链式反应和核酶的传感器及癌胚抗原检测方法

权利要求书

1.一种基于杂交链式反应和核酶的荧光适配体传感器，其特征在于，包括核酸适配体探针与发夹探针，所述核酸适配体探针包括核酸适配体序列、引发链序列及互补序列，所述发夹探针包括第一发夹探针与第二发夹探针，所述第一发夹探针和所述第二发夹探针都是含有G-四链体核酶碱基的序列，所述核酸适配体探针特异性识别癌胚抗原，所述核酸适配体探针构象转换，使所述第一发夹探针与所述第二发夹探针形成双链DNA，同时，在hemin存在的情况下，所述第一发夹探针与所述第二发夹探针自组装形成hemin/G-四链体核酶，所述hemin/G-四链体核酶催化氧化过氧化氢介导的硫胺素并发出荧光，可定量检测所述癌胚抗原。

2.根据权利要求1所述的基于杂交链式反应和核酶的荧光适配体传感器，其特征在于，所述核酸适配体探针为发夹结构。

3.根据权利要求1所述的基于杂交链式反应和核酶的荧光适配体传感器，其特征在于，所述核酸适配体序列为特异性识别癌胚抗原的核酸适配体序列，所述核酸适配体序列为5’-ATACCAGCTTATTCAATT-3’，所述引发链序列为5’-AGAAGAAGGTGTTTAAGTA-3’。

4.权利要求1-3任意一项所述基于杂交链式反应和核酶的荧光适配体传感的应用，其特征是用于检测癌胚抗原。

5.一种癌胚抗原检测方法，其特征是包括以下步骤：

(1)核酸适配体探针、第一发夹探针、第二发夹探针与癌胚抗原首次开盖使用前先离心，分别将其溶于二次水中配成100μM的母液，再用第一缓冲液分别稀释成核酸适配体探针溶液、第一发夹探针溶液和第二发夹探针溶液，在4℃保存待用；

(2)将核酸适配体探针溶液、第一发夹探针溶液与第二发夹探针溶液分别加热反应并冷却至室温备用；

(3)将步骤(2)加热反应后的核酸适配体探针溶液、第一发夹探针溶液、第二发夹探针溶液与不同浓度的癌胚抗原溶液、免疫球蛋白G、甲胎蛋白或者前列腺特异性抗原在第一缓冲液中反应，得到混合液；

(4)在步骤(3)混合液中加入hemin反应，得到反应液；

(5)将步骤(4)反应液与硫胺素、过氧化氢在第二缓冲液中反应，检测荧光信号强度。

6.根据权利要求5所述的癌胚抗原检测方法，其特征在于，所述步骤(1)核酸适配体探针溶液、第一发夹探针溶液和第二发夹探针溶液的浓度分别为5μM、5μM、5μM。

7.根据权利要求5所述的癌胚抗原检测方法，其特征在于，所述第一缓冲液为Tris-HCl缓冲液，所述Tris-HCl缓冲液的pH为7.4，所述第二缓冲液为K₂HPO₄-NaOH缓冲液，所述K₂HPO₄-NaOH缓冲液的pH为12，步骤(2)中，加热反应温度为85℃～95℃，反应时间为5分钟～15分钟。

8.根据权利要求5所述的癌胚抗原检测方法，其特征在于，所述步骤(3)中所述核酸适配体探针溶液浓度为10nM～100nM，所述第一发夹探针溶液浓度为1nM～500nM，所述第二发夹探针溶液浓度为1nM～500nM，反应温度为25℃～45℃，反应时间为4小时～8小时。

9.根据权利要求5所述的癌胚抗原检测方法，其特征在于，所述步骤(4)中hemin的浓度为0.1μM～1μM，室温下反应，反应时间1小时～4小时。

10.根据权利要求5所述的癌胚抗原检测方法，其特征在于，所述步骤(5)中，硫胺素溶液浓度为6mM，过氧化氢溶液浓度为20mM，反应温度为室温，反应时间为10分钟～30分钟。