[发明专利]一种鉴定枫香属植物的分子标记引物、其应用及鉴定方法

说明书

本发明公开了一种鉴定枫香属植物的分子标记引物、其应用及鉴定方法。本发明通过高通量测序所得的转录组序列为基础进行了枫香EST‑SSR标记的开发，从NCBI数据库下载转录组序列读段，拼接组装Unigenes。用MISA软件寻找SSR位点，用Primer3来设计引物。筛选多态性SSR引物，得到多态性引物信息。最终得到多态性SSR引物32对。本发明提供的引物可以辅助鉴定枫香属品种的鉴定并作为种质资源评价，遗传图谱构建，分子辅助选择育种，遗传多样性分析等方面有力的研究工具，为进一步的枫香属植物遗传育种研究奠定基础。

技术领域

本发明涉及一种鉴定植物的分子标记引物、其应用以及植物鉴定方法，特别涉及一种鉴定枫香植物的EST-SSR分子标记引物、其应用以及植物鉴定方法，本发明属于植物品种的分子生物学鉴定方法技术领域。

背景技术

枫香属(Liquidambar spp.)树种生长速度快、材性好并且适于上山造林，特别是北美枫香(L.styraciflua)和枫香(L.formosana)。另外，随着我国的国民经济水平日益提高，对具有较高观赏价值的树种需求也与日俱增。枫香和北美枫香是著名观赏树种，具有较高的开发价值。枫香属树种是虎耳草亚目金缕梅科的落叶乔木，共有5个种及1个变种，我国有枫香树(中国枫香树)，缺萼枫香树以及山枫香树，主要分布于我国东部黄河以南地区及台湾省，生长速度快，在天然野生状态下也表现出很强的适应性。其材质优良，用途广泛，而且对二氧化硫，氯化物有较强的抗性，枫香树属共有5个种及1个变种，我国有枫香树(中国枫香树)，缺萼枫香树以及山枫香树，近年来，北美枫香树及苏合枫香树在我国也得到了培养及种植。枫香树属植物均为落叶乔木，叶互生，掌状分裂且具掌状脉，叶缘呈锯齿状；雌雄同株的单性花，花瓣无，子房两室，半下位；蒴果木质。枫香树生长于平原，丘陵及山地常绿阔叶林中，其高度可达30米，胸径最大可达1米。光照充足，湿润温暖的气候及肥沃而深厚的红黄壤土适宜其生长。其主根粗长，有较强的抗风性，移植及修剪不利于其生长。种子有隔年发芽的习性，对盐碱及干旱的抗性较差，不耐寒，黄河以北地区不能露地越冬，故多生长于南方地区。我国秦岭及淮河以南各省均，北起河南、山东，东至台湾，西至四川、云南及西藏，南至广东都有分布，世界范围内亦见于朝鲜南部，越南及老挝地区。我国秦岭及淮河以南各省均，北起河南、山东，东至台湾，西至四川、云南及西藏，南至广东都有分布，世界范围内亦见于朝鲜南部，越南及老挝地区。枫香幼年生长速度较慢，但壮年后生长速度很快且树木材质良好，适应性强，是公认的植树造林中的“先锋树种”。枫香木制细密柔软，方便加工处理，在干燥环境下十分耐用，有“搁起万年枫”的说法，其根，叶，皮，花序树脂均能入药，树脂药用有解毒止痛、止血生肌之效，又可作香料之定香剂；根、叶及果实有祛风除湿，通络活血功效，叶为止血良药。对肠胃疾病，痢疾等症有治疗效果。在园林用途方面，枫香树干粗壮笔直，气势雄伟，其冠部宽阔，树叶深秋时颜色鲜红，十分美丽壮观，在园林中可栽做庭荫树，与常绿树种混植，秋季红绿相映，如陆游道“数树丹枫映苍桧”，构成一幅宜人美景。又因其对有毒气体抗性较强，尤其对SO2以及氯化物的抗性极强，常用于厂矿区绿化。枫香树叶中的化学成分以酚类，挥发油，和黄酮类为主。由于其含有较多黄酮类衍生物。

SSR序列是一种串联重复序列片段，以最少一个核苷酸为基本单位(simplesequence repeats)，称SSR，又称微卫星DNA(microsatellite DNA)，以1-4个碱基为重复单位的序列最常见，例如(TG)n、(GA)n、(GTA)n等，长度不大于200bp，在真核生物的基因组中广泛存在，包括非编码区、编码区及染色体上的某一区。SSR分子标记技术具有共显性、涵盖度广、检测简易、操作方便、用时短、揭示多态性高等优点，加之近几十年的不断发展，更加得到了广泛的应用。是基因定位、构建遗传连锁图谱、研究群体遗传学、构建指纹数据库、分子标记辅助育种及品种鉴定等的理想工具。SSR在植物种间、种内群体间、乃至群体个体间均存在高度多态性，不同物种的SSR序列在组成、长度、重复次数、突变率及在染色体上的分布情况表现出高度的多态性，反映出高度的等位基因多样性。