[发明专利]诱导性细胞外囊泡在制备治疗肿瘤药物中的应用

说明书

本发明公开了间充质干细胞来源的诱导性细胞外囊泡在制备治疗肿瘤的药物中的应用。本申请的发明人发现，MSCs产生的IEVs能够在体外促进多发性骨髓瘤细胞系5TGMI细胞的凋亡，而体内注射IEVs能够显著延长多发性骨髓瘤小鼠的寿命，并缓解其骨质丧失等症状，因此，通过优化MSCs来源的IEVs来治疗多发性骨髓瘤将具有良好的应用前景。采用本发明的方法治疗多发性骨髓瘤，疗效显著，而且能显著延长患者寿命，副作用很小。

技术领域

本发明涉及肿瘤治疗技术领域，尤其是一种间充质干细胞来源的诱导性细胞外囊泡的用途。

背景技术

细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)是细胞分泌的含有蛋白质、核酸及各种细胞因子的纳米级载体。细胞外囊泡可以通过内分泌或旁分泌的方式作用于靶细胞，在细胞间物质传递和信息交流过程中发挥了重要作用。研究发现，细胞外囊泡所介导的信息交流在机体生理或病理过程中发挥了重要的调控作用，涉及到免疫调节、肿瘤生长、血管生成、损伤修复等。目前该领域的研究主要集中在外泌体(exosomes)方向。外泌体是直径在30-150nm左右的细胞外囊泡，其内含有RNA、脂质和蛋白质等成分。外泌体广泛参与了机体的各种生理/病理性调控，能够用作多种疾病的诊断、治疗和预后评估。

迄今为止，间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)被认为是产生外泌体能力最强的细胞。众多的研究发现MSCs来源的外泌体能模拟MSCs的生物学功能，在促进细胞生长和分化，修复组织缺损等方面发挥了重要的调控作用。因此，近年来以MSCs来源的外泌体为基础的细胞囊泡疗法取得了显著的发展。然而，目前以外泌体为基础的细胞囊泡治疗仍然存在诸多问题，主要表现在外泌体的提取和纯化过程复杂，耗时长，对设备和试剂的要求较高，生理性外泌体产量较低等等，这些缺陷都限制了外泌体治疗的临床转化和应用。

细胞凋亡是细胞程序性死亡，其特征包括明显的细胞收缩、染色质浓缩和细胞膜出泡。细胞凋亡产生大量的凋亡小体，含有多种细胞成分。星形孢菌素(staurosporine，STS)能够在体外诱导MSCs的细胞凋亡，在此过程中会产生大量的细胞外囊泡。以往研究主要集中在细胞凋亡本身，对伴随产生的细胞外囊泡缺乏系统和深入的研究。本申请的发明人/课题组的前期研究证实，STS体外诱导产生的细胞外囊泡对MSCs的稳态有重要的调节作用，能够显著改善骨质疏松小鼠的骨质破坏情况。与外泌体相比，这种诱导性细胞外囊泡(induced extracellular vesicles,IEVs)更具有优势，主要体现在：IEVs的产量更加丰富，单个MSC能够产出300-1000个IEVs；IEVs的制备流程简单，耗时短，对试剂和设备的要求低，治疗效果好。因此，以MSCs来源的IEVs为基础的细胞外囊泡疗法具备良好的应用前景。

多发性骨髓瘤(MM，multiple myeloma)是一种血液系统恶性肿瘤，发病率已经超过急性白血病。常见临床表现为骨痛、贫血、肾功能不全、感染。我国骨髓瘤发病率约为1/10万，低于西方工业发达国家(约4/10万)，但有逐年增加的趋势。其发病年龄多见于50-60岁之间的中年和老年，男女比例约为2：1。目前WHO将其归为B细胞淋巴瘤的一种，称为浆细胞骨髓瘤/浆细胞瘤。其特征为骨髓浆细胞异常增生伴有单克隆免疫球蛋白或轻链(M蛋白)过度生成，由于正常免疫球蛋白的生成受抑制，因此容易出现各种细菌性感染。

在造血系统恶性肿瘤中,多发性骨髓瘤迄今仍然不可治愈。传统化疗是治疗多发性骨髓瘤的标准方法，化疗能杀死大多数病患的多发性骨髓瘤细胞，这也是消灭肿瘤的最直接方法之一，但由于血液肿瘤的特殊发病机制，消灭整个血液系统中的癌细胞往往需要大剂量的化疗，对应的副作用十分强烈。此外，在绝大部分病例中，不论时间长短，骨髓瘤细胞最终都会对化疗产生抗药性。由于患病早期没有明显症状，治疗后的多发性骨髓瘤复发率又相当高，因此亟需开发针对多发性骨髓瘤的新的治疗策略。

发明内容

基于上述问题，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种能有效治疗多发性骨髓瘤的方法，其能显著延长患者寿命，副作用很小。