[发明专利]一种基于微型分子标记的恰特草鉴定方法及应用

权利要求书

1.一组用于鉴定恰特草分子的引物组合物，其特征在于：所述引物组合物由用于扩增恰特草微型分子标记mat K、rbc L和trn H-psb A的引物组成；

所述用于扩增mat K的引物序列如下：

CeK1-F 5' CCGCAAAGTAGAAGAAGC 3'

CeK 1-R 5' ACGGAGTCAAATGGTGGA 3'

CeK 2-F 5' TGCCAATAATCCAATCAAAG 3'

CeK 2-R 5' TGCCAATAATCCAATCAAAG 3'

CeK 3-F 5' GATTCGCTCAAGAAGGAC 3'

CeK 3-R 5' GATGCTGGGTGAAAGATG 3'

CeK 4-F 5' TTCCAAGTCCAATACTCA 3'

CeK 4-R 5' TACTCGAATGGATCAACA 3'

CeK 5-F 5' AATGACTGAGAAACCCTC 3'

CeK 5-R 5' GACTTCCTATACCCACTT 3'；

所述用于扩增rbc L的引物序列如下：

CeL1- F 5' CCACAAACCGAGACTAAA 3'

CeL1-R 5' CCAAAGACATTACCCACA 3'

CeL2-F 5' GAGCCCGTTGCTGGAGAA 3'

CeL2-R 5' CGCGGAGACATTCATAAACT 3'

CeL3-F 5' CAAGTATGGACGCCCTCT 3'

CeL3-R 5' TCTCGGCAATAATGAGCC 3'

CeL4-F 5' GTACATGCGAAGAAATGA 3'

CeL4-R 5' CTTGAGTGAAATAAATACCG 3'

CeL5-F 5' GTAGTAGGTAAACTTGAGGGTG 3'

CeL5-R 5' CGAGCAAGATCACGTCCC 3'；

所述用于扩增trn H-psb A的引物序列如下：

CeH-A-F 5' TGCAATCTTTCTCGTCTA 3'

CeH-A -F 5' AAAGGGAATTGGTTATCG 3'。

2.权利要求1所述的引物组合物在恰特草鉴定中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述恰特草样品的DNA发生降解。

4.一种DNA发生降解的恰特草样品种属鉴定方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1，从待测样品中提取叶绿体DNA序列；

步骤2，以步骤1的叶绿体DNA序列作为模板，采用权利要求1的引物组合物对其进行PCR扩增，扩增产物进行Sanger双向测序；

步骤3，根据测序结果，对mat K基因的5个微型片段CeK1、CeK2、CeK3、CeK4、CeK5进行拼接，对rbcL基因的5个微型片段CeL1、CeL2、CeL3、CeL4、CeL5进行拼接，获得完整序列，用获得的CematK、CerbcL、CetrnH-psbA完整序列片段进行BLAST同源比对，确定样品种属。