[发明专利]用于间充质干细胞膜蛋白定性分析的组合物及方法和应用

说明书

一种用于间充质干细胞膜蛋白定性分析的组合物，包括SEQ ID No 1所示的寡聚脱氧核糖核苷酸链，其5′末端标记了荧光基团。本发明通过DNA链识别细胞的膜蛋白以及获得扩增的荧光信号，从而实现对靶标细胞膜蛋白的无损分析，还可以根据靶标细胞(如：间充质干细胞甚至其他不同种类细胞表面的膜蛋白)的特定检测需求而量身定制，满足不同分析的实际需求，具有良好的应用潜能。

技术领域

本发明涉及一种用于检测的组合物，特别涉及一种对蛋白质进行定性检测的组合物，实现对间充质干细胞膜蛋白无损分析。

背景技术

间充质细胞(Mesenchymal stem cells，MSCs)起源于胚胎中胚层的干细胞，广泛存在于机体各处。其中，间充质干细胞属于中胚层的一类多能干细胞，主要存在于结缔组织和器官间质中，集中在骨髓和脂肪组织中，并具有多种潜能。在特定条件下，可以在体内和体外被诱导分化为不同类型的细胞，如：软骨细胞、成骨细胞、脂肪细胞、神经细胞和心肌细胞等。其易于分离和培养，体外扩增潜能高。临床实验证实，间充质干细胞移植可用于组织修复及治疗间充质组织遗传缺陷性疾病，是一种极具吸引力的治疗工具。CD44蛋白是一组分布广泛，分子量为(85～160)×10kD的多分子形式的膜整合蛋白，介导细胞与细胞间及细胞与细胞外基质间的相互作用，CD44在很多种肿瘤细胞的表达比相应正常组织为高，并与肿瘤细胞的成瘤性、侵袭性及淋巴转移性有关。因此，对间充质干细胞膜蛋白标志物CD44的分析可以为多种骨疾病、肺损伤、糖尿病、神经系统疾病、自身免疫性疾病等疾病的临床判断提供许多重要的信息。

关于检测CD44蛋白的方法有很多种，但都是传统的免疫荧光(IF)，免疫印迹(WB)和质谱(MS)等方法。免疫印迹和质谱的方法虽然可以提供蛋白质的定量信息，但对细胞具有破坏性，需要裂解细胞并先提取蛋白质。免疫荧光技术是一种强大的免疫化学技术，可通过荧光团修饰抗体原位非结构破坏性地检测多种膜蛋白。但该方法需要用抗体对靶蛋自进行不可逆标记，这可能会不可预测地影响膜蛋白和细胞的活性。DNA是脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid)的简称，作为一种天然的生物大分子，在纳米尺度上构建功能结构方面有得天独厚的优势。DNA纳米技术自提出以来，因具有结构可编程性、良好的生物相容性和生物稳定性、无明显的细胞毒性和免疫刺激性，以及能够自主入胞等特点，在生物医药领域引起了广泛的关注，已经用于肿瘤的成像与检测。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种组合物，含有荧光修饰的DNA链，用于对靶标细胞膜蛋白实施原位成像的定性分析。

本发明的另一个目的在于提供一种组合物，含有荧光修饰的DNA链，其与间充质干细胞的膜蛋白结合后，使得膜蛋白表达和细胞活性不受影响，实现无损分析。

本发明的再一个目的在于提供一种分析的细胞方法，实现对样本中靶标细胞膜蛋白CD44的原位成像的定性分析。

本发明的又一个目的在于提供一种试剂盒，实现对样本中靶标细胞膜蛋白CD44的原位成像的定性分析。

本发明所称的靶标细胞，系对样本中含有的拟检测的细胞总称，比如：但不限于体细胞、干细胞和癌细胞等。

一种组合物，包括：

SEQIDNo 1所示的寡聚脱氧核糖核苷酸链，其5′末端标记了荧光基团(如：红色荧光基团Cy5)。

另一种组合物，包括

SEQIDNo 1所示的适体引物(Apt-Pri)，其5′末端标记了红色荧光基团(如：Cy5)；

SEQIDNo 2所示的辅助引物(Ass-Pri)；

SEQIDNo 3所示的环状DNA模板(LOOP)；

SEQIDNo4所示的分子信标(MB)，5′和3′端分别修饰了绿色荧光基团FAM和猝灭基团BHQ。