[发明专利]一种链球菌新型选择性标记和应用

说明书

本发明涉及一种链球菌新型选择性标记，所述标记由启动子ldhp和基因smu1289组成。本标记增加了一个新的非抗生素抗性的筛选标记，其能够代替传统的抗生素抗性基因作为遗传筛选标记使用，从而能够降低因抗生素抗性的使用所造成的安全风险。

技术领域

本发明属于分子生物技术领域，涉及用于转化生物的选择标记基因，尤其是一种链球菌新型选择性标记和应用。

背景技术

选择性标记是一种可以检测的遗传性状或能够被鉴定和追踪的DNA区段。选择性标记基因在基因功能研究和工程菌株构建过程中具有重要的作用。目前，链球菌常用的选择性标记有：红霉素抗性基因、壮观霉素抗性基因、氯霉素抗性基因。这些选择性标记都是基于抗生素抗性的选择性标记。抗生素抗性标记使用具有一定的安全风险，特别是在工业微生物领域受到很大的限制。一种新的基于非抗生素抗性的选择性标记不仅能够在基因功能研究方面与现有的遗传标记互相补充，还能够降低抗生素抗性的使用所造成的安全风险。

氟是地球上存在的主要元素之一，约占地壳组成的0.78g/kg。主要以氟化物的形式存在于岩石和土壤中。日常使用的口腔护理产品、某些国家和地区的饮用水中也有一定浓度的氟化物，氟化物在龋齿预防方面发挥着重要的作用。高浓度的氟化物对细菌细胞有毒性。

通过检索，尚未发现与本发明专利申请相关的专利公开文献。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术中的不足之处，提供一种链球菌新型选择性标记和应用，该标记增加了一个新的非抗生素抗性的筛选标记，其能够代替传统的抗生素抗性基因作为遗传筛选标记使用，从而能够降低因抗生素抗性的使用所造成的安全风险。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种链球菌新型选择性标记，所述标记由启动子ldhp和基因smu1289组成。

而且，所述启动子ldhp的核苷酸序列为SEQIDNo.1，所述基因smu1289的核苷酸序列为SEQIDNo.2。

而且，所述启动子ldhp与基因smu1289组合而成的功能性氟化物抗性基因序列为SEQID No.3。

如上所述的链球菌新型选择性标记在作为链球菌选择性标记方面中的应用。

而且，所述应用为：将启动子ldhp和基因smu1289连接入质粒PDL278构建重组质粒，所述重组质粒导入宿主菌，在氟化钠抗性条件下筛选，获得转化子。

而且，所述氟化钠抗性条件为：含有氟化钠抗性的固体培养基。

而且，所述固体培养基为：pH6.0，氟化钠浓度为75ug/ml的THB培养基。

本发明取得的优点和积极效果为：

1、本发明标记增加了一个新的非抗生素抗性的筛选标记，其能够代替传统的抗生素抗性基因作为遗传筛选标记使用，从而能够降低因抗生素抗性的使用所造成的安全风险。

2、本发明涉及氟化物转运蛋白编码基因作为选择性标记在链球菌遗传转化中的应用。氟化物广泛存在于自然界中，高浓度的氟化物能够抑制细胞的生长。我们前期研究在变型链球菌中发现一个氟化物转运蛋白编码基因，该基因的过表达能够赋予细胞对高浓度氟化物的抗性。利用该氟化物抗性基因作为选择性标记，成功实现了遗传转化子筛选。在基因功能研究和遗传工程菌株改造方面，该氟化物抗性基因能够代替传统的抗生素抗性基因作为遗传筛选标记使用，从而能够降低因抗生素抗性的使用所造成的安全风险。

附图说明

图1为本发明中变形链球菌野生型与smu1291转座子的耐氟性检测图；

图2为本发明中变形链球菌野生型与△smu1291的耐氟性检测图；