[发明专利]一种短小蛇根草色氨酸脱羧酶基因OpTDC2的克隆表达及应用有效
申请号: | 202010088611.1 | 申请日: | 2020-02-12 |
公开(公告)号: | CN111187785B | 公开(公告)日: | 2021-07-16 |
发明(设计)人: | 开国银;尤大伟;冯岳;黄超;范三鹏;张通 | 申请(专利权)人: | 浙江中医药大学 |
主分类号: | C12N15/60 | 分类号: | C12N15/60;C12N9/88;C12N15/70;C12Q1/527 |
代理公司: | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人: | 邱启旺 |
地址: | 310053 浙*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 小蛇 色氨酸 脱羧酶 基因 optdc2 克隆 表达 应用 | ||
1.一种短小蛇根草色氨酸脱羧酶基因OpTDC2,其特征在于,所述色氨酸脱羧酶OpTDC2的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.一种权利要求1所述的色氨酸脱羧酶基因OpTDC2的克隆表达方法,其特征在于,通过将色氨酸脱羧酶基因OpTDC2构建至原核表达载体pCold TF中得到重组质粒pCold TF-OpTDC2,并将阳性重组质粒pCold TF-OpTDC2转入BL21(DE3)感受态细胞中组成重组菌株;重组菌株在诱导剂IPTG的诱导下表达出可溶性蛋白OpTDC2;所述重组质粒pCold TF-OpTDC2的序列如SEQ ID NO.4所示,其中原核表达载体pCold TF的序列如SEQ ID NO.3所示。
3.一种权利要求1所述的短小蛇根草色氨酸脱羧酶基因OpTDC2在催化色氨酸生成色胺中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,催化色氨酸生成色胺的温度为15~60℃,pH为5.5~11.0,辅因子浓度为0.1~3.0mmol·L-1。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,催化色氨酸生成色胺的温度为45℃,pH为8.0,辅因子浓度为0.1mmol·L-1。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述的催化色氨酸生成色胺的反应中还包括金属离子Mn2+,Mn2+的终浓度为10mmol·L-1。
7.根据权利要求3-6任一项所述的应用,其特征在于,所述辅因子为磷酸吡哆醛。
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