[发明专利]靶向人源化CD22的嵌合抗原受体及其用途

说明书

本发明涉及一种靶向人源化CD22的嵌合抗原受体及其用途。具体而言，本发明提供一种核酸序列，选自：含有依次连接的人DAP12的编码序列、T2A的编码序列、人源化CD22单链抗体的编码序列、人TREM1跨膜和胞内区的编码序列。本发明还提供相关的融合蛋白、含所述编码序列的载体，以及所述融合蛋白、编码序列、载体的用途。

技术领域

本发明属于嵌合抗原受体领域，具体涉及靶向CD22的嵌合抗原受体及其用途。

背景技术

CD22是分子量为135kD的B细胞限制性跨膜唾液酸糖蛋白，表达于前B细胞的胞浆内、成熟正常B细胞和91％到99％的侵袭性和顽性B细胞群的表面，其主要功能为:①作为亲合素特异性结合含有α-2,6-硅酸糖蛋白，介导同型或异型细胞亲合作用；②通过B细胞受体复合物作为共受体调节信号。CD22作为NHL导向治疗靶分子的特点为：①只选择性表达于正常和恶性的成熟B淋巴细胞系，非B淋巴细胞、骨髓细胞、造血干细胞和非造血细胞系不表达CD22，所以CD22为靶点的治疗不会影响任何不表达CD22的组织，也不会抑制新的B细胞生成；②表达于成熟和恶性B细胞膜上较好的内化分子，当CD22分子被配体结合后，细胞能将配体内吞入细胞内，所以与放射性核素、毒素结合可能增加治疗效果；③在所有恶性细胞上的表达稳定，不随胞外环境不同而发生抗原调变。

随着肿瘤免疫学理论和临床技术的发展，嵌合抗原受体T细胞疗法(Chimericantigen receptor T-cell immunotherapy，CAR-T)成为目前最有发展前景的肿瘤免疫疗法之一[Schmitz M，et al.Chimeric antigen receptor-engineered T cellsforimmunotherapy of Cancer.J Biomed Biotechnol，2010，doi：10.1155/2010/956304.]。嵌合抗原受体(CAR)是CAR-T的核心部件，CAR能针对所选择的免疫细胞重定向其特异性和反应性，因此赋予T细胞HLA非依赖的方式识别肿瘤抗原的能力，这使得经过CAR改造的T细胞相较与正常T细胞受体(TCR)应答不同，不受MHC限制，具有活化和增殖的能力，因此具有高效的杀伤肿瘤细胞的能力。

嵌合抗原受体(CAR)在T细胞上表达合成蛋白，其将抗体的抗原识别片段(如抗体单链可变区片段)与胞内信号结构域融合。研究发现，以肿瘤特异性单克隆抗体的单链可变区(scFv)取代TCR的α，β链可变区，并将scFv直接和T细胞信号传导结构域连接，形成嵌合抗原受体(CAR)表达于T细胞表面，可通过scFv识别肿瘤特异性抗原，直接产生T细胞的活化信号，促进T细胞活化、增殖，特异性杀伤肿瘤细胞。该过程主要依赖CAR-T细胞表面的scFv对肿瘤抗原的特异性识别，免疫反应的特异性和杀伤性较强。

本发明对构建的靶向CD22的新型CAR，本发明采用的是人源化CD22(hu C2B)单链抗体，hu C2B具有高亲和力。hu C2B是靶向CD22的人源化形式的单克隆抗体，对肿瘤具有治疗和诊断作用。本发明对CAR-T细胞进行了修饰，针对CD22靶点发挥CAR-T细胞抗肿瘤作用。本发明为临床实验和临床治疗奠定良好的基础。

随着CAR-T细胞治疗经验的积累和不断完善，其在恶性肿瘤中的应用越来越受到各界关注。在此环境下，我们要加快步伐，利用自身已有的工作基础、研发团队、医疗团队申请开展临床试验，推动CAR-T细胞治疗在治疗恶性肿瘤的道路上快速前进。

发明内容

本发明第一方面提供一种核酸序列，所述核酸序列选自：

(1)含有依次连接的人自然杀伤激活受体相关蛋白(DAP12)的编码序列、T2A的编码序列、抗CD22单链抗体的编码序列、人髓样触发受体(TREM1)跨膜和胞内区的编码序列。