[发明专利]一种肺腺癌肿瘤标记物蛋白及其应用

说明书

本发明涉及一种可以用于检测早期肺腺癌的肿瘤标记物蛋白LAC‑M及其应用。所述LAC‑M蛋白是通过捕获正常人与肺腺癌患者血清蛋白多肽图谱，并将两者进行比较，筛选得到对肺腺癌具备高度特异性的肿瘤标记物。同时，本发明涉及一种基于所述LAC‑M标记物的Elisa检测方法及其试剂盒，所述检测方法具备较高的特异性，能够快速进行肺腺癌的血清学检测。

技术领域

本发明属于肿瘤领域，特别涉及一种用于检测肺腺癌的肿瘤标记物蛋白的筛选、及其检测应用。

背景技术

肺癌是全球范围内发病率及死亡率最高的癌种。肺癌按病理类型可以分为小细胞肺癌(small lung cancer,SCLC)和非小细胞肺癌(non-small lung cancer,NSCLC)；非小细胞肺癌约占肺癌种类的85％，而小细胞肺癌约占15％；其中NSCLC又分为鳞癌、腺癌、大细胞癌、肉瘤样癌等，其中，肺腺癌占到肺癌中的约50，是最为常见的肺癌类型。研究发现，不吸烟女性肺癌患者多数为肺腺癌类型。

肺腺癌大多数起源于较小的支气管黏膜分泌粘液的上皮细胞，因此大多数腺癌位于肺的周围部分，呈球形肿块，靠近胸膜。女性病人较为多见，发病年龄亦较小。肺腺癌与吸烟无密切关系，一部分病例癌肿发生在肺纤维疤痕病变的基础上。腺癌在早期一般没有明显的临床症状，往往在胸部X线检查时才发现，因此通过一定检测手段筛查出易患肺腺癌的高危人群，指导这类人群提早预防肺腺癌的发生至关重要。

肺腺癌的预后较差，5年生存率仅15％，这主要是由于晚期诊断和对转移性疾病有限的治疗手段有关。目前对于肺腺癌的早期检测受到如下几个因素的阻碍：第一，在疾病的早期没有特定的临床症状；第二，肺腺癌患者的年龄较大，侵略性治疗干预受限，患者接受度差；第三，低剂量螺旋CT假阳性率高并且昂贵，不适合广泛的筛查。此外，辐射暴露可能增加肺癌风险。目前尚缺乏灵敏度和特异度均满意的用于肺腺癌诊治相关的生物标志物。

随着后基因组时代的到来，蛋白质组研究越来越受到国内外科技工作者的关注，蛋白质组是指“一个细胞或一个组织基因组所表达的全部蛋白质”。从蛋白质组学角度看肿瘤是一种蛋白质缺陷病，其发生过程中有许多蛋白质发生了异常变化，从而导致肿瘤组织表达的蛋白质图谱的变化。肿瘤蛋白质组学研究主要是为了建立肿瘤细胞和组织的蛋白质表达谱及研究肿瘤细胞和组织与正常细胞和组织之间差异表达的蛋白质，以期发现用于肿瘤诊断、预后和治疗的分子标志物。

目前肺癌特别是肺腺癌相关血清标志物特异性、敏感度低，因此临床医学亟待寻找正确率、灵敏度、特异度高的新的肺腺癌相关血清标志物。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够用于早期肺癌特别是肺腺癌的蛋白标志物及其在肺腺癌早期诊断中的应用。为实现上述目的，本申请发明人通过捕获正常人与肺腺癌患者血清蛋白多肽图谱，并且采用ClinProTools2.1软件对比分析血清蛋白多肽谱图差异，找出组间显著差异表达的蛋白多肽分值，筛选出在肺腺癌患者血清中显著高表达的蛋白多肽峰值中筛出肺腺癌血清肿瘤标志物。

本发明使用的多肽谱图捕获技术是质谱技术，是当前在蛋白质组学研究中最广泛使用的蛋白质分析方法。由质谱技术发展而来的蛋白质指纹图谱SELDI-TOE-MS技术，即表面增强激光解析电离飞行时间质谱，是一种包含层析与质谱的特殊蛋白质芯片技术，它综合了芯片微阵列与质谱技术两者的优点。

SELDI-TOF-MS包括蛋白质芯片、飞行质谱仪和分析软件三部分。其原理是利用高能激光束使芯片中的分析物解析形成离子，根据不同质荷比，这些离子在仪器场中飞行的时间长短不一，由此绘制出一张质谱图。经电脑处理后，直接显示样品中各种蛋白质的分子量、含量等信息。同时还可将它与正常人或某种疾病患者的图谱，甚至数据库中的图谱进行对照，从而发现和捕获新的疾病特异性相关蛋白及其特征。采用这种高灵敏度的蛋白质指纹图谱技术寻找高特异性和高敏感性的肿瘤标志物已成为当前临床医学研究的热点之一。