[发明专利]用于延长药物半衰期的抗体、其融合蛋白和应用

说明书

本发明属于治疗性抗体药领域，具体涉及一种用于延长药物半衰期的抗体。所述抗体序列是针对人血清白蛋白的仅包含特定重链可变区的抗体。所述抗体可以与短肽分子、抗体分子、抗体片段、细胞因子、干扰素、肿瘤坏死因子、肿瘤标志分子等治疗性蛋白质或多肽药物在原核系统中融合表达，产物具有延长的药物半衰期和提高的生物利用率。

技术领域

本发明属于治疗性抗体药领域，涉及一种用于延长药物半衰期和提高药物 生物利用率的抗体及其应用。

背景技术

大多数蛋白和多肽药物的半衰期很短，一是因为蛋白质药物会被体内的蛋 白酶降解而快速清除；二是由于肾小球的过滤作用使分子量小于60kDa的药 物在肾脏代谢中也易被清除。

现有技术中，尝试了各种方法延长药物体内半衰期，包括对分子结构进行 改造和缀合，然而各种分子设计都或多或少存在一些问题。以GLP-1(胰高血 糖样素-1)分子为例，天然的GLP-1在人体血循环中可以被二肽酶Ⅳ(dipeptidyl pepidiaseⅣ，DPPⅣ；CD26)迅速降解，其体内半衰期只有2-5分钟，不具 备成药性。采用氨基酸突变、赖氨酸残基脂肪链修饰、PEG化等技术可以达 到每天一次用药。已经上市的此类GLP-1类似物包括(1)艾塞那肽(商品名 Byetta)是第一个上市的GLP-1类似物，皮下注射，初始计量一次5ug，一天 两次；(2)利拉鲁肽(商品名Victoza/Saxenda)每日注射一次，每次注射 0.6mg-1.8mg；(3)利司那肽(商品名Lyxumia)起始剂量为10μg，每日一次， 应用14天，维持剂量：在第15天开始20μg为固定维持剂量，每日一次。上 述方法中，较为常用的方法是将多肽或蛋白质药物直接与化合物PEG相连形 成聚合物，然而这样会使药物的分子量变大，同时会增加药物的副作用。

在此基础之上研制的二代GLP-1类似物，采用HSA或Fc蛋白融合技术， 可以达到一周一次用药。例如，将多肽或蛋白质药物直接与人Fc区相连融合 表达的杜拉鲁肽(商品名：)是由美国Lily公司研发的新型长效 GLP-1R激动药，由两个具有DPP-4抑制作用的GLP-1类似物和人免疫球蛋 白重链IgG4-Fc片段融合得到，其活性与内源性GLP-1相似，半衰期为5天， 能有效延缓肾脏的清除作用。FDA于2014批准的杜拉鲁肽皮下注射液上市。 每周给药一次，每次给药量0.75mg-1.5mg。然而与人Fc区融合表达的药物具 有引发ADCC、CDC的风险。另一种方法是将多肽或蛋白质药物直接与化合 物PEG相连形成聚合物，然而这样会使药物的分子量变大，同时会增加药物 的副作用。还有一种方法是将多肽或蛋白质药物直接与人血清白蛋白(Human Serum Albumin，HSA)相连融合表达。人血清白蛋白是人体血液中的主要蛋白， 该蛋白由585个氨基酸构成，是人体循环系统内的含量最多的可溶性蛋白，在 血液中的浓度为34～54g/L.白蛋白是最丰富的血浆蛋白，具有高度的可溶性， 非常稳定，能与人体内药物分子结合运输到体内各个部位发挥疗效。目前市场 上的阿必鲁肽(Albiglutide)，是两个GLP-1分子串联后在C端连上改造后的人 血清白蛋白，建议给药量30毫克，每周一次。然而与人血清白蛋白融合表达 的药物分子量较大，不具有很好的细胞穿透性。

尽管目前市场上已有多种延长多肽或蛋白质药物半衰期的药物，但不是用 量大就是半衰期短，仍有必要进一步开发具有延长的药物半衰期，同时成本更 为低廉，患者依从性更好的药物结构。

发明内容

本发明涉及一种延长治疗性蛋白质治疗效果特别是延长其半衰期的方法， 特别是该方法中使用的具有特定结构的抗体，以及依照该方法所获得的包含治 疗性蛋白质的融合蛋白。

具体而言，本发明利用特定引物扩增获得的抗体cDNA而构建噬菌体库， 并筛选得到了与人血清白蛋白结合的一组抗人血清白蛋白抗体，该抗体在与特 定治疗性蛋白质药物融合表达后可延长药物半衰期。

本发明的一方面涉及一种抗体，其特征在于仅包含抗人血清白蛋白抗体的 重链可变区，优选由FR1、FR2、FR3、FR4、CDR1、CDR2、CDR3组成。