[发明专利]牛活体采卵用的抽卵液及其制备方法和用途

说明书

本发明涉及牛活体采卵用的抽卵液及其制备方法和用途，具体的，本发明的抽卵液包含：丙酮酸钠15～25mg、4‑羟乙基哌嗪乙磺酸300～400mg、TCM199为5～15mL、L‑谷氨酰胺10～20mg、碳酸氢钠10～20mg、肝素0.5～1.5mg、青霉素5～7mg、链霉素10～15mg、胎牛血清1～3mL、水适量至100mL。本发明还涉及抽卵液在用于牛活体取卵的试剂中的用途。进一步的，本发明还涉及处理牛活体取卵采集的卵泡的方法，该方法包括使通过牛活体取卵采集的卵泡与本发明抽卵液混合的操作。本发明采卵回收液即抽卵液具有优异的生物学效果，例如有助于维持卵丘卵母细胞复合体(COCs)的生物学结构特征，这对于提高牛活体采卵的工作效率具有重要意义。

技术领域

本发明属于生物技术领域涉及一种活体采卵的方法，尤其是涉及一种用于牛活体采卵的采卵回收液，该采卵回收液亦称为抽卵液，本发明还涉及该等采卵回收液在牛活体采卵中的用途。本发明采卵回收液具有优异的生物学效果，例如有助于维持卵丘卵母细胞复合体(COCs)的生物学结构特征，这对于提高牛活体采卵的工作效率具有重要意义。

背景技术

胚胎培养技术对于家畜的繁殖潜力挖掘、快速扩繁以及种质资源保护具有重要的价值。影响胚胎体外培养和体外胚胎保存的因素有很多，其中卵母细胞体外成熟、体外受精、早期胚胎体外培养以及胚胎冷冻是体外胚胎生产过程中的四个个主要环节。

牛活体取卵(OPU)是继体外受精(IVF)和胚移植(ET)之后的用于牛胚胎实验操作和生产繁殖的一项非常实用的胚胎工程技术。在20世纪80年代报道在B超监视下施行牛活体取卵操作以来，这项技术已被广泛用于牛胚胎体外生产。牛活体取卵这项技术具有应用广泛、操作便利、高效和可重复性以及损伤小等优点。通过联合应用牛活体取卵和体外受精这两种技术，可充分提高良种牛的繁殖潜力和大量生产高质量的胚胎。

牛活体取卵为体外生产高品质牛胚胎提供了一个有价值的方法。随着牛基因组测序的完成，以及新的数量性状位点的绘制，通过牛活体取卵回收具有清晰遗传背景的卵母细胞，将为在分子水平上研究牛胚胎发育提供宝贵的实验材料，并最终为生产优质牛胚胎产生显著的经济和实用价值。

体外受精(In Vitro Fertilization)或(external fertilization)是指哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术，英文简称为IVF。由于它与胚胎移植技术(ET)密不可分，又简称为IVF-ET。在生物学中，把体外受精胚胎移植到母体后获得的动物称试管动物(test-tube animal)。这项技术成功于20世纪50年代，在最近20年发展迅速，现已日趋成熟而成为一项重要而常规的动物繁殖生物技术。

体外受精技术对动物生殖机理研究、畜牧生产、医学和濒危动物保护等具有重要意义。如用小鼠、大鼠或家兔等作实验材料，体外受精技术可用于研究哺乳动物配子发生、受精和胚胎早期发育机理。在家畜品种改良中，体外受精技术为胚胎生产提供了廉价而高效的手段，对充分利用优良品种资源，缩短家畜繁殖周期，加快品种改良速度等有重要价值。在人类，IVF-ET技术是治疗某些不孕症和克服性连锁病的重要措施之一。体外受精技术还是哺乳动物胚胎移植、克隆、转基因和性别控制等现代生物技术不可缺少的组成部分。

随着现代农业科技的发展，为了更充分利用良种母牛的繁殖潜力，加速遗传育种进程，在生产实践中应用高效的繁殖新技术成为必然。活体采卵(Ovum pick UP，OPU)和体外受精技术(In Vitro Fertilization，IVF)是二十世纪八十年代快速发展起来的胚胎工程新技术，二者相结合可获得大量遗传系谱明确的胚胎，从而缩短世代间隔。目前，这两种技术已经成为欧美和大洋洲等畜牧业发达国家的农场主为扩大良种母牛群而采用的重要繁殖技术。然而，采用常规的牛胚胎培养体系(CR1aa和SOF液)，牛体外受精的囊胚发育率较低，而且胚胎质量也远不及体内胚胎，导致胚胎移植受体后的妊娠率低，因此如何提高囊胚发育率及胚胎质量成为体外受精胚胎生产的重点和研究的焦点。