[发明专利]用于牛活体采卵的采卵回收液

说明书

本发明属于生物技术领域涉及一种活体采卵的方法，尤其是涉及一种用于牛活体采卵的采卵回收液。具体地说，一方面，本发明涉及一种抽卵液，其包含：丙酮酸钠15～25mg、4‑羟乙基哌嗪乙磺酸300～400mg、TCM199为5～15mL、L‑谷氨酰胺10～20mg、碳酸氢钠10～20mg、肝素0.5～1.5mg、青霉素5～7mg、链霉素10～15mg、胎牛血清1～3mL、水适量至100mL。进一步的，本发明还涉及处理牛活体取卵采集的卵泡的方法，该方法包括使通过牛活体取卵采集的卵泡与抽卵液混合的操作。本发明方法和抽卵液呈现如说明书所述优异技术效果。

技术领域

本发明属于生物技术领域涉及一种活体采卵的方法，尤其是涉及一种用于牛活体采卵的采卵回收液。

背景技术

牛活体取卵(OPU)是继体外受精(IVF)和胚移植(ET)之后的用于牛胚胎实验操作和生产繁殖的一项非常实用的胚胎工程技术。在20世纪80年代报道在B超监视下施行牛活体取卵操作以来，这项技术已被广泛用于牛胚胎体外生产。牛活体取卵这项技术具有应用广泛、操作便利、高效和可重复性以及损伤小等优点。通过联合应用牛活体取卵和体外受精这两种技术，可充分提高良种牛的繁殖潜力和大量生产高质量的胚胎。

牛活体取卵为体外生产高品质牛胚胎提供了一个有价值的方法。随着牛基因组测序的完成，以及新的数量性状位点的绘制，通过牛活体取卵回收具有清晰遗传背景的卵母细胞，将为在分子水平上研究牛胚胎发育提供宝贵的实验材料，并最终为生产优质牛胚胎产生显著的经济和实用价值。

牛活体取卵的一项重要工具是源于人类临床上常用的B超原理设计的兽用B超诊断仪。B超诊断对提高畜牧业的管理水平，促进畜牧业经济发展有重要的意义。使用兽用B超诊断技术来评价水牛繁殖力，可使我们在发情周期和怀孕中了解和认识水牛卵巢与子宫的状态，更好地提高繁殖性能和推进动物遗传进程。

在采用B超诊断仪时，需要使用抽卵液冲洗采卵针及连接胶管并使抽取的卵泡液与抽卵液混合后，进行后续的实验室检卵、分级等操作，然而，由于每取一次卵到取下一次卵、对一头牛取卵到对下一头年取卵，直至完全更多数量的取卵，通常需要较长时间，这就造成，先取的卵与后取的卵在后续统一进行检卵等操作前会有不同的放置时间，卵泡在抽卵液中等待的时长不同会通常会影响活体取卵的效果和效率。

目前常用的抽卵液是以磷酸盐缓冲液或者TCM199液作为基础液添加肝素配制而成。例如，一种典型的抽卵液配方如下：丙酮酸钠20mg、4-羟乙基哌嗪乙磺酸350mg、TCM199为10mL、L-谷氨酰胺15mg、碳酸氢钠15mg、肝素1mg、青霉素6mg、链霉素13mg、胎牛血清2mL、水适量至100mL。然而已经发现类似上述的抽卵液仍然存在技术上的不足。

因此，提供一种抽卵液使得卵泡在其中存放不同时间后仍然保持不变的生物学状态，仍是本领域技术人员迫切期待的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抽卵液，期待从牛活体取卵采集的卵泡在此抽卵液中存在足够长的时间后仍然保持不变的生物学状态。本发明人出人意料地发现，采用本发明的抽卵液，可以在显著更长的时间内使存在于该抽卵液中的卵泡保持不变的生物学状态。本发明基于此发现而得以完成。

为此，本发明第一方面提供了一种抽卵液，其是用作牛活体采卵的采卵回收液，因此在本文中亦可称为采卵回收液，其包含：丙酮酸钠15～25mg、4-羟乙基哌嗪乙磺酸300～400mg、TCM199为5～15mL、L-谷氨酰胺10～20mg、碳酸氢钠10～20mg、肝素0.5～1.5mg、青霉素5～7mg、链霉素10～15mg、胎牛血清1～3mL、水适量至100mL。

根据本发明第一方面的抽卵液，其中包含：丙酮酸钠20mg、4-羟乙基哌嗪乙磺酸350mg、TCM199为10mL、L-谷氨酰胺15mg、碳酸氢钠15mg、肝素1mg、青霉素6mg、链霉素13mg、胎牛血清2mL、水适量至100mL。