[发明专利]一种精子外源基因转染方法

说明书

本发明公开了一种精子外源基因转染方法，包括以下步骤：A、将载体与外源基因进行混合，制得载体与外源基因的复合物；B、将奶牛精子放入氯化钙溶液中，缓慢搅拌15min；C、将步骤A制得的复合物放入步骤B的氯化钙溶液中，进行转染1h；D、在步骤C的氯化钙溶液中插入电击管，进行电击转染3h。本发明可以解决现有技术的不足，提高了稳定转染的效率。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是一种精子外源基因转染方法。

背景技术

近年来基因重组技术快速发展，其中通过转染方式进行基因重组是一种常用的方法。传统基因转染技术在形成稳定转染的效率上较低，如何提高转染效率成为了本领域亟待解决的技术问题之一。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种精子外源基因转染方法，能够解决现有技术的不足，提高了稳定转染的效率。

为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案如下。

一种精子外源基因转染方法，步骤如下：

A、将载体与外源基因进行混合，制得载体与外源基因的复合物；

B、将奶牛精子放入氯化钙溶液中，缓慢搅拌15min；

C、将步骤A制得的复合物放入步骤B的氯化钙溶液中，进行转染1h；

D、在步骤C的氯化钙溶液中插入电击管，进行电击转染3h。

作为优选，步骤A中，载体包含有SEQ ID NO.1的核苷酸序列所表示的编码基因。

作为优选，步骤B中，氯化钙溶液的浓度为7wt％。

作为优选，步骤C中，复合物与奶牛精子的摩尔比为10∶1。

作为优选，步骤D中，电击管的电压为180V。

采用上述技术方案所带来的有益效果在于：

本发明通过使用高效率载体提高了转染的靶向性，同时配合优化后的转染操作步骤，实现载体与细胞的快速融合，从而实现提高转染效率的目的。

具体实施方式

一种精子外源基因转染方法，步骤如下：

A、将载体与外源基因进行混合，制得载体与外源基因的复合物；

B、将奶牛精子放入氯化钙溶液中，缓慢搅拌15min；

C、将步骤A制得的复合物放入步骤B的氯化钙溶液中，进行转染1h；

D、在步骤C的氯化钙溶液中插入电击管，进行电击转染3h。

步骤A中，载体包含有SEQ ID NO.1的核苷酸序列所表示的编码基因。步骤B中，氯化钙溶液的浓度为7wt％。步骤C中，复合物与奶牛精子的摩尔比为10∶1。步骤D中，电击管的电压为180V。

本发明可以将奶牛精子稳定转染的效率至少提高15％。

上述描述仅作为本发明可实施的技术方案提出，不作为对其技术方案本身的单一限制条件。