[发明专利]一种双抗原夹心法检测2019新型冠状病毒抗体的重组蛋白、试纸条及制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种双抗原夹心法检测2019新型冠状病毒抗体的重组蛋白、试纸条及制备方法和应用，属于病毒检测技术领域。本发明所述双抗原夹心法检测2019新型冠状病毒抗体的重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明所述重组蛋白为2019‑nCoV多个优势表位的融合蛋白，能够制备得到抗原双夹心法2019‑nCoV病毒抗体检测试剂，可实现常温保存，且能够快速、高灵敏度、高通量、低仪器成本、单人份随时检测，操作简便，可大大提高临床使用简便性。

技术领域

本发明涉及病毒检测技术领域，具体涉及一种双抗原夹心法检测2019新型冠状病毒(2019-nCoV)抗体的重组蛋白、试纸条及制备方法和应用。

背景技术

冠状病毒是一个大型病毒家族，已知可引起感冒、中东呼吸综合征(MERS)和严重急性呼吸综合征(SARS)等较严重疾病。新型冠状病毒是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株，2019-nCoV是人类分离的第七类冠状病毒。相关疾病监测，发现多起病毒性肺炎病例，均诊断为病毒性肺炎/肺部感染。

新型冠状病毒感染人体后一般有3～14天(有个别案例报道最长24天)的潜伏期，潜伏期内可无临床症状，不易发现。目前的证据表明，潜伏期感染者也有传染性，增大了阻断病毒传播的难度。新型冠状病毒感染临床症状主要表现为发热、咳嗽、乏力等非特异症状，与普通感冒难以区分，其确诊依赖实验室诊断技术。

目前新型冠状病毒感染诊断主要依赖基于聚合酶链式反应(PCR)或核酸测序检测病毒特异性基因序列来进行。但是核酸诊断需要有特殊的实验室(要求有4个在物理空间上完全相互独立的区域)和数十种配套设备以及专业操作人员(需认证)才能完成，且检测过程操作复杂，需要数小时才能完成；极易产生气溶胶污染，造成假阳性，也存在因为取样不合适造成漏检的情况，因此核酸检测不适合现场大规模开展。

免疫学诊断主要是通过抗原抗体免疫反应检测人体感染病毒以后产生的特异性抗体来诊断。免疫学诊断方法具有操作简单、检测速度快、无需特殊场地及(复杂)仪器设备，且敏感性高等优点，适用于现场大规模开展新型冠状病毒感染筛查及诊断工作。免疫学诊断已报道的方法学主要是胶体金法，ELISA等，检测血液中的病毒特异性IgM和IgG抗体，属于间接法，采用抗原和抗人免疫球蛋白二抗构建检测系统，受基质Ig影响比较大，特异性差，灵敏度也不理想。双抗原夹心法灵敏度高，特异性强，但是目前市面上和文献还未有比较理想的针对2019-nCoV的双抗原夹心的原料的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种双抗原夹心法检测2019新型冠状病毒抗体的重组蛋白、试纸条及制备方法和应用。本发明所述重组蛋白为2019-nCoV多个优势表位的融合蛋白，能够制备得到抗原双夹心法2019-nCoV病毒抗体检测试剂，可实现常温保存，且能够快速、高灵敏度、高通量、低仪器成本、单人份随时检测，操作简便，可大大提高临床使用简便性。

本发明提供了一种双抗原夹心法检测2019新型冠状病毒抗体的重组蛋白，所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明还提供了一种双抗原夹心法检测2019新型冠状病毒抗体的试纸条，包括底板以及依次搭接粘贴在底板上的样品吸收垫、荧光微球垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述荧光微球垫喷涂有荧光微球标记的2019新型冠状病毒多优势表位融合蛋白，所述硝酸纤维素膜上固定有检测区和质控区，所述检测区喷涂有2019新型冠状病毒多优势表位融合蛋白，所述质控区喷涂有抗N蛋白抗体；所述2019新型冠状病毒多优势表位融合蛋白为上述技术方案所述的重组蛋白。

优选的是，所述试纸条检测的样本包括唾液、尿液、血清、血浆和全血样本。

优选的是，所述试纸条还包括样本稀释液；所述样本稀释液包括PB溶液和Tween-20；所述PB溶液的浓度为0.008～0.012mol/L；所述样本稀释液中Tween-20的体积含量为0.4％～0.6％。