[发明专利]一种规模化生产胚毒类抗原的净化方法

说明书

本发明提供了一种规模化生产的胚毒类抗原的纯化方法，能够对灭活抗原液中残存的变性杂蛋白进行彻底清除，进一步提高疫苗的安全性。本发明的方法，首先将胚毒类灭活抗原由甲醛灭活时的温度进行降温操作；再将降温的灭活抗原进行静置，然后将静置后的灭活抗原以13000g～16000g离心力高速离心，获得的上清液为纯化的胚毒类抗原。本发明的方法使残存的杂蛋白先通过变温致杂蛋白变性析出，再借助离心的方法，去除杂蛋白的同时，保持目的抗原的完整结构。

技术领域

本发明属于疫苗抗原制备技术领域，具体涉及一种规模化生产的胚毒类抗原的净化方法，即一种针对规模化生产条件下，经过甲醛灭活的胚毒类抗原的纯化方法。

技术背景

针对目前规模化生产条件下，包括禽流感病毒在类的胚毒类抗原在甲醛灭活前虽然经过现有的离心、浓缩纯化工序，以去除部分杂质，但抗原液经过甲醛灭活后，残存的杂蛋白发生结构改变，造成变性。

在现有疫苗制备领域，有些疫苗制备过程中，在甲醛灭活后会直接进入后续油乳剂灭活疫苗配苗乳化环节；也有少数生产过程中会利用过滤的原理，采用不锈钢网在有压力的前提下对灭活抗原进行过滤。

但经过研究和实践发现，上述简单的过滤方法无法彻底去除变性的杂蛋白。因为灭活后杂蛋白性状发生变化，在有压力的情况下会分解成小颗粒物质，以逃避不锈钢网的截留，制成的疫苗会随着储存时间的延长，杂蛋白依然会出现聚集现象，严重影响疫苗的外观品质，给用药动物造成巨大的应激反应的同时，会降低目的抗原的免疫效果。

发明内容

本发明针对现有的工艺无法彻底解决灭活后抗原液中残存的变性杂蛋白问题，提供了一种规模化生产的胚毒类抗原的纯化方法，能够对灭活抗原液中残存的变性杂蛋白进行彻底清除，进一步提高疫苗的安全性。

本发明所提供的规模化生产的胚毒类抗原的纯化方法，包括如下的步骤：

S1：将胚毒类灭活抗原由甲醛灭活时的温度进行降温操作；

所述的甲醛灭活时的温度，为36～37℃；

所述的降温操作，是将灭活抗原的温度降至2～15℃；

作为优选，是在在1小时内时间内降温至2～15℃；

S2：将降温的灭活抗原进行静置，静置的时间为7～14d；

所述的静置温度为2～15℃；

S3：将静置后的灭活抗原以13000g～16000g离心力高速离心，获得的上清液为纯化的胚毒类抗原；

所述的离心，优选为借助碟片式高速离心机。

其中胚毒类抗原，包含有鸡新城疫抗原、禽流感抗原、传染性支气管炎抗原、鸡减蛋综合征抗原等。

本发明的方法具有如下的优点：

1、从蛋白质学角度，使残存的杂蛋白先通过变温致杂蛋白变性析出，再借助离心的方法，去除杂蛋白的同时，保持目的抗原的完整结构。

2、本发明采用碟片式高速离心机去除变性杂蛋白，是由于传统管式离心机不带有定期排渣功能，以致随着离心量的加大和时间的延长，管壁残渣不断增厚，严重影响后续待离心液的纯化效果。而碟片式高速离心机大大提高了抗原的纯化效果。

附图说明

图1：抗原纯化前后浊度OD600区别图，

图2：抗原纯化前后HA效价区别图，

图3：规模化生产灭活抗原离心(纯化)前后浊度(OD600)区别图，

图4：规模化生产灭活抗原离心(纯化)前后HA区别图。

具体实施方式