[发明专利]一种Ⅱ型犬腺病毒的可视化等温扩增检测试剂及其应用

权利要求书

1.用于检测Ⅱ型犬腺病毒的可视化等温扩增引物组，其特征在于，所述引物组由以下引物组成：

上游内引物FIP：

CGAGGGCATTGTAGGCGGTG-GAATTC-GGGTACCCTAGACAGAGGC；

下游内引物BIP：

CCAAGGCCGGGGCTAACAAC-GGCACCTGGGCTAAAGTG；

上游外引物F3：GCTGGACATGGCCAGTAC；

下游外引物B3：TCACAGTTATGGCACCTGC；

加速上游环状引物LF1:CCGCTGTAAGGCTTGAAGGAG

加速下游环状引物LB1:CTTTTTAATGGACAGGGTGCCAATA。

2.一种Ⅱ型犬腺病毒的可视化等温扩增检测试剂，所述试剂为Ⅱ型犬腺病毒的可视化等温检测试剂，其特征在于，所述试剂包括权利要求1中所述的引物组。

3.根据权利要求2所述的可视化等温扩增检测试剂，其特征在于，所述试剂还包括如下组分：10×反应缓冲液、dNTPs、Mg²⁺、Bst DNA聚合酶、去离子水、模板DNA和显色试剂。

4.根据权利要求3所述的可视化等温扩增检测试剂，其特征在于，所述试剂中Mg²⁺的浓度为6mmol·L^-1。

5.根据权利要求3所述的可视化等温扩增检测试剂，其特征在于，所述试剂中dNTPs的浓度为1.5mmol·L^-1；作为优选，所述试剂中显色试剂为酚红与甲酚红混合指示剂。

6.根据权利要求3所述的可视化等温扩增检测试剂，其特征在于，所述试剂还包括阳性对照。

7.一种Ⅱ型犬腺病毒的可视化等温扩增检测试剂盒，所述试剂盒为Ⅱ型犬腺病毒的可视化等温检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括权利要求2-6中任一项所述的可视化等温扩增检测试剂。

8.权利要求2-6任一项所述的检测试剂或权利要求7所述的检测试剂盒在如下任一种条件下的应用：

一、不以疾病的诊断和治疗为目的的检测或辅助检测Ⅱ型犬腺病毒；

二、制备用于检测或辅助检测Ⅱ型犬腺病毒的产品；

三、不以疾病的诊断和治疗为目的的检测或辅助检测待测动物样品是否感染Ⅱ型犬腺病毒；

四、制备用于检测或辅助检测待测动物样品是否感染Ⅱ型犬腺病毒的产品；

五、不以疾病的诊断和治疗为目的的检测待测病毒是否为Ⅱ型犬腺病毒；

六、制备用于检测或辅助检测待测病毒是否为Ⅱ型犬腺病毒的产品。

9.一种检测或辅助检测待测动物样品是否感染Ⅱ型犬腺病毒的方法，该方法不以疾病的诊断和治疗为目的，其特征在于，包括以下步骤：

反应步骤：从待测动物肛门、唾液或泪腺分泌物拭子样品提取基因组DNA作为模板，采用权利要求2-6任一项所述的检测试剂或权利要求7所述的检测试剂盒进行环介导等温扩增，得到扩增产物；作为优选，所述环介导等温扩增的反应条件为：恒温63℃，反应40min；

确认步骤：按照下述任一方法确定待测动物样品是否感染Ⅱ型犬腺病毒：

A、扩增产物呈现橙黄色则待测动物样品感染Ⅱ型犬腺病毒；扩增产物呈现紫红色则待测动物样品未感染Ⅱ型犬腺病毒；

B、将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，电泳条带呈梯状分布，则待测动物样品感染Ⅱ型犬腺病毒；仅有一条引物条带，则待测动物样品未感染Ⅱ型犬腺病毒。

10.一种检测或辅助检测待测病毒为Ⅱ型犬腺病毒的方法，该方法不以疾病的诊断和治疗为目的，其特征在于，包括以下步骤：

反应步骤：从待测病毒中提取基因组DNA作为模板，采用权利要求2-6任一项所述的检测试剂或权利要求7所述的检测试剂盒进行环介导等温扩增，得到扩增产物；作为优选，所述环介导等温扩增的反应条件为：恒温63℃，反应40min；

确认步骤：按照下述任一方法确定待测病毒是否为Ⅱ型犬腺病毒：

A、扩增产物呈现橙黄色则待测病毒是Ⅱ型犬腺病毒；扩增产物呈现紫红色则待测病毒不是Ⅱ型犬腺病毒；

B、将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，电泳条带呈梯状分布，则待测动物病毒是Ⅱ型犬腺病毒；仅有一条引物条带，则待测病毒不是Ⅱ型犬腺病毒。