[发明专利]Pn3-32-i5蛋白及其编码基因在生产三七皂苷R1中的应用

权利要求书

1.Pn3-32-i5蛋白为如下a1)或a2)：

a1)氨基酸序列是SEQ ID NO：5所示的蛋白质；

a2)在SEQ ID NO：5所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。

2.编码权利要求1所述Pn3-32-i5蛋白的核酸分子。

3.如权利要求2所述的核酸分子，其特征在于：所述核酸分子为如下b1)或b2)所示的DNA分子：

b1)编码区是SEQ ID NO：1所示的DNA分子；

b2)核苷酸序列是SEQ ID NO：1所示的DNA分子。

4.含有权利要求2或3所述核酸分子的表达盒、重组载体或重组微生物。

5.权利要求1所述Pn3-32-i5蛋白的应用，为如下c1)或c2)或c3)或c4)：

c1)生产三七皂苷R1；

c2)制备用于生产三七皂苷R1的产品；

c3)作为三七皂苷R1合成酶；

c4)制备具有三七皂苷R1合成酶的功能的产品。

6.权利要求2或3所述的核酸分子的应用，为如下c1)或c2)或c3)：

c1)生产三七皂苷R1；

c2)制备用于生产三七皂苷R1的产品；

c3)制备具有三七皂苷R1合成酶的功能的产品。

7.制备用于生产三七皂苷R1的工程菌的方法，包括如下步骤：提高受体酵母菌中磷酸葡萄糖变位酶1、α-磷酸葡萄糖变位酶、尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶、拟南芥UDP-葡萄糖脱氢酶1、拟南芥UDP-葡萄糖醛酸脱羧酶3、人参UDP-糖基转移酶101和权利要求1所述Pn3-32-i5蛋白的表达量和/或活性，从而获得所述用于生产三七皂苷R1的工程菌；

所述受体酵母菌是通过提高酿酒酵母中羟甲戊二酰辅酶A还原酶1、法尼基焦磷酸合酶、鲨烯合酶、鲨烯环氧酶、达玛烯二醇-II合酶、原人参二醇合酶、原人参三醇合酶、细胞色素P450还原酶的表达量和/或活性获得的。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于：所述“提高受体酵母菌中磷酸葡萄糖变位酶1、α-磷酸葡萄糖变位酶、尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶、拟南芥UDP-葡萄糖脱氢酶1、拟南芥UDP-葡萄糖醛酸脱羧酶3、人参UDP-糖基转移酶101和权利要求1所述Pn3-32-i5蛋白的表达量和/或活性”是通过向所述受体酵母菌中导入磷酸葡萄糖变位酶1的编码基因、α-磷酸葡萄糖变位酶的编码基因、尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的编码基因、拟南芥UDP-葡萄糖脱氢酶1的编码基因、拟南芥UDP-葡萄糖醛酸脱羧酶3的编码基因、人参UDP-糖基转移酶101的编码基因和权利要求1所述Pn3-32-i5蛋白的编码基因来实现的。

9.如权利要求7所述的方法，其特征在于：所述受体酵母菌为酵母菌BY-PPD-PPT。

10.权利要求7至9任一所述方法制备得到的用于生产三七皂苷R1的工程菌。

11.权利要求10所述工程菌在生产三七皂苷R1中的应用。

12.一种生产三七皂苷R1的方法，包括如下步骤：发酵培养权利要求10所述工程菌，收集发酵产物，从中获得三七皂苷R1。