[发明专利]基于环介导恒温扩增技术检测B族链球菌的引物组、试剂盒及检测方法

说明书

本发明提供了一种基于环介导恒温扩增技术检测B族链球菌的引物组，包括SEQ ID NO：1～2所示的内引物对、SEQ ID NO：3～4所示的外引物对和SEQ ID NO：5～6所示的环引物对。本发明还提供了一种基于环介导恒温扩增技术检测B族链球菌的试剂盒及检测方法。所述引物组能快速、特异性地扩增B族链球菌的靶标基因；所述试剂盒能对B族链球菌基因进行快速的定性检测；所建立的检测方法具有操作简便、检测时间短、检测准确性、灵敏度高等优点。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，特别涉及一种基于环介导恒温扩增技术检测B族链球菌的引物对、试剂盒及检测方法。

背景技术

B族链球菌是一种常见的感染细菌，孕妇感染后会出现早产、羊膜腔炎，甚至流产、死产，此外该细菌还可通过子宫或在分娩中而传染给新生儿而引起严重后果，每年大约有2200名新生儿因感染B族链球菌而死亡。对孕妇进行B族链球菌筛查可及早发现感染及时治疗，有效控制其危害。

目前对B族链球菌的检测多是依赖于PCR扩增技术，但该技术通常需要昂贵的仪器设备，需要后续的电泳操作，昂贵的探针合成，且存在耗时长、灵敏度低等缺点，不利于快速检测和应急检测。随着人们对于分子生物领域的不断深入研究，一种全新的核酸扩增技术—环介导恒温扩增技术(Loop mediated isothermal amplification，LAMP)越来越受到研究人员的亲睐。该技术在操作便捷性、扩增效率、灵敏度、省时性等方面均高于PCR技术。但目前利用LAMP技术检测B族链球菌的相关研究较少，且对其的检测效率较低、准确度不高。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种基于环介导恒温扩增技术检测B族链球菌的引物组、试剂盒及检测方法，以实现对B族链球菌的简单、快速、特异性检测。

第一方面，本发明提供了一种基于环介导恒温扩增技术检测B族链球菌的引物组，所述引物组包括内引物对、外引物对和环引物对，其中，所述内引物对包括SEQ ID NO：1所示的正向内引物FIP和SEQ ID NO：2所示的反向内引物BIP，所述外引物对包括SEQ ID NO：3所示的正向外引物F3和SEQ ID NO：4所示的反向外引物B3，所述环引物对包括SEQ ID NO：5所示的正向环引物LF和SEQ IDNO：6所示的反向环引物LB。

可选地，所述内引物对与所述外引物对、所述环引物对的摩尔比为(1～8)：1：(1～4)。优选为8：1：4。在该比例下，采用所述引物组可以实现对B族链球菌的较佳扩增效果。

进一步可选地，所述正内引物FIP和反向内引物BIP的摩尔比为1：1，所述正向外引物F3和反向外引物B3的摩尔比为1：1，所述正向环引物LF和反向环引物LB的摩尔比为1：1。

本发明第一方面提供的基于LAMP检测B族链球菌的所述引物组，是针对B族链球菌表面免疫原性蛋白sip的编码DNA上的6个特定高保守区域(F₁、F₂、F₃、B₁、B₂、B₃)而设计，6个区域中任一区域与所述引物组若不匹配均不能进行核酸扩增，具有很强的特异性。所述引物组能快速、特异性扩增B族链球菌的基因，扩增效果较佳。

第二方面，本发明还提供了一种基于环介导恒温扩增技术检测B族链球菌的试剂盒，所述试剂盒包括核酸染料和如本发明第一方面所述的引物组。所述试剂盒具体利用荧光标记环介导恒温扩增技术来检测B族链球菌。

可选地，所述试剂盒还包括缓冲剂、链置换DNA聚合酶、脱氧核糖核苷三磷酸(dNTPs)、镁盐。