[发明专利]基于双重环介导恒温扩增技术检测新型冠状病毒的探针、引物、试剂盒及检测方法

说明书

本发明提供了一种基于双重环介导恒温扩增技术检测新型冠状病毒的引物，包括第一引物组和第二引物组，第一引物组包括SEQ ID.NO.3～4所示的第一内引物对、SEQ ID.NO.5～6所示的第一外引物对、SEQ ID.NO.7～8所示的第一环引物对；第二引物组包括SEQ ID.NO.9～10所示的第二内引物对、SEQ ID.NO.11～12所示的第二外引物对、SEQ ID.NO.13‑SEQ ID.NO.14所示的第二环引物对。所述第一引物组和第二引物组分别能快速、特异性地扩增新型冠状病毒的不同靶标基因。本发明还提供了检测新型冠状病毒的探针、试剂盒及方法。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，特别涉及一种基于双重环介导恒温扩增技术检测新型冠状病毒的探针、引物、试剂盒及检测方法。

背景技术

2019年年底爆发的新型冠状病毒肺炎严重影响了人们的身体健康，目前已因该病造成的死亡人数已远超2003年爆发的非典型肺炎(SARS)。目前对该新型冠状病毒(记作“2019-nCoV”)的临床检测多是依赖于PCR扩增技术，但该技术的操作复杂，需要昂贵的仪器设备，且存在耗时长、灵敏度低、易产生结果误判等缺点，不利于快速检测和应急检测。因此，有必要提供一种能简单、快速、特异性检测新型冠状病毒的技术，以提高检测效率和准确度。

发明内容

有鉴于此，本发明基于双重环介导恒温扩增技术(Duplex Loop mediatedisothermal amplification，Duplex LAMP)提供了一种检测新型冠状病毒的探针、引物、试剂盒及检测方法，以在对样本的单次测试中同步实现对新型冠状病毒的两种靶标基因的简单、快速、特异性检测，提高检测效率和准确度。

第一方面，本发明提供了一种基于双重LAMP技术检测新型冠状病毒的探针，所述探针包括第一探针和第二探针，其中，所述第一探针包括如SEQ ID NO：1所示的第一核苷酸片段，所述第二探针包括如SEQ ID NO：2所示的第二核苷酸片段，所述第一核苷酸片段和所述第二核苷酸片段的两端独立地标记有荧光报告基团和荧光淬灭基团；其中，所述第一探针可以与新型冠状病毒的ORF1ab基因的环介导恒温扩增产物特异性结合而报告第一荧光信号，所述第二探针可以与新型冠状病毒的N基因的环介导恒温扩增产物特异性结合而报告第二荧光信号，其中，所述第一荧光信号与所述第二荧光信号不同。

上述“所述第一核苷酸片段和所述第二核苷酸片段的两端独立地标记有荧光报告基团和荧光淬灭基团”可以理解为：所述第一核苷酸片段的5’端标记有第一荧光报告基团，3’端标记有第一荧光淬灭基团，所述第二核苷酸片段的5’端标记有第二荧光报告基团，3’端标记有第二荧光淬灭基团。

本发明所述第一探针、第二探针上标记的荧光报告基团和荧光淬灭基团要相匹配，以使在目标核酸不存在或未扩增时，某一探针上标记的荧光报告基团发射的荧光信号会被其上标记的荧光淬灭基团所吸收。但要注意使上述第一荧光信号与第二荧光信号不同，以便区分出两种检测靶标。

可选地，所述荧光报告基团包括羧基荧光素(FAM)、羧基-X-罗丹明(carboxy-X-rhodamine，ROX)、六氯-6-甲基荧光素(HEX)、花青素染料(Cyanines dyes)、德克萨斯红染料(Texas Red)、羧基四甲基罗丹明(TAMRA)、2,7-二甲基-4,5-二氯-6-羧基荧光素(JOE)、四氯-6-羧基荧光素(TET)和异硫氰酸荧光素(FITC)中的一种或多种，但不限于此。

可选地，所述荧光淬灭基团包括羧基四甲基罗丹明(TAMRA)、4-[(2-氯-4-硝基-苯基)-偶氮基]-苯胺(Eclipse)、黑洞淬灭剂(black hole quencher，BHQ)4-(4’-恶烷氨基苯偶氮)苯甲酸(DABCYL)和4-(N,N-二甲基氨基)偶氮苯-4’-磺酸氯(DABSYL)中的一种或多种，但不限于此。