[发明专利]缺刻缘绿藻CDP-乙醇胺：二酰甘油乙醇胺磷酸转移酶的基因序列和应用

说明书

本发明属于基因工程领域，公开了缺刻缘绿藻CDP‑乙醇胺:二酰甘油乙醇胺磷酸转移酶的基因序列和应用，MiEPT基因包括SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3所示或与其互补的核苷酸序列，其编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，重组表达载体通过上述核苷酸序列与质粒构建得到，基因工程化的宿主细胞包括上述核苷酸序列或重组表达载体经转化或转导的宿主细胞及其后代细胞。本发明的核苷酸序列、编码蛋白、重组蛋白、重组表达载体或宿主细胞可用于CDP‑乙醇胺途径中将二酰甘油和CDP‑乙醇胺催化合成磷脂酰乙醇胺。

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体涉及缺刻缘绿藻CDP-乙醇胺:二酰甘油乙醇胺磷酸转移酶(MiEPT)的基因序列和应用。

背景技术

生物膜的基本成分是膜脂，而膜脂主要包括磷脂、糖脂和胆固醇等3种类型，其中磷脂约占整个膜脂的50％以上，因此可以说磷脂是膜脂的基本成分。磷脂又可分为2类：甘油磷脂和鞘磷脂；其中甘油磷脂是磷脂中的第一大类，包括磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰丝氨酸(PS)和磷脂酰肌醇(PI)等，这些甘油磷脂是由sn-甘油-3-磷酸衍生而来，即在甘油碳骨架的sn-1和sn-2位被脂肪酸酯化而形成的产物。PE和PC是细胞膜中最丰富的脂质，PE的生物合成一般经过2个途径：一个是PS在线粒体中脱羧，另一个是CDP-乙醇胺途径。在CDP-乙醇胺途径中，目前已发现的PE合成酶有乙醇胺激酶磷酸(EK)、CTP:磷酸乙醇胺胞苷酰转移酶(ET)和CDP-乙醇胺:1,2-二酰基甘油乙醇胺磷酸转移酶(EPT)，其中EPT是在PE从头合成途径中的最后一步起催化作用。因此，EPT是PE合成的关键酶。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种分离的核苷酸序列，所述的核苷酸序列包括：a)如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3所述的核苷酸序列；或b)与a)所述的核苷酸序列互补的核苷酸序列。

本发明的第二目的在于提供一种编码蛋白，所述编码蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO:2所示。

本发明的第三目的在于提供一种重组蛋白rMiEPT，所述重组蛋白rMiEPT的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。

本发明的第四目的在于提供一种重组表达载体，所述重组表达载体包含任一所述的核苷酸序列，且由其与质粒构建得到；在优选的实施方案中，所述的质粒是pET23a质粒。

本发明的第五目的在于提供一种基因工程化的宿主细胞，所述的宿主细胞选自：ⅰ)任一所述的核苷酸序列转化或转导的宿主细胞及其后代细胞；或ⅱ)任一所述重组表达载体转化或转导的宿主细胞及其后代细胞。在一些实施方案中，所述的宿主细胞是细菌细胞、真菌细胞、植物细胞或动物细胞，或上述任一宿主细胞的后代。

本发明的第六目的在于提供上述任一所述核苷酸序列、编码蛋白、重组蛋白、重组表达载体或宿主细胞在催化合成磷脂酰乙醇胺中的应用，进一步在CDP-乙醇胺途径中将二酰甘油和CDP-乙醇胺催化合成为磷脂酰乙醇胺。

为实现上述目的，本发明的技术方案是：

①在温度为25℃、光照强度为115μmol photons/(m²·s)、光暗比为12h/12h的条件下，于BG-11培养基中培养缺刻缘绿藻(Myrmecia incisa Reisigl)H4301，收集藻细胞，并提取基因组DNA和总RNA。