[发明专利]丙酮酸光学探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种光学探针，包含丙酮酸敏感多肽和光学活性多肽，其中光学活性多肽位于丙酮酸敏感多肽的序列内。

2.如权利要求1所述的光学探针，其中，丙酮酸敏感多肽具有SEQ ID NO:1所示的序列或其功能片段，或与其有35％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、99％序列相同性的序列，优选地，丙酮酸敏感多肽具有SEQ ID NO:1所示序列的第96-254位氨基酸，或与其有35％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、99％序列相同性的序列。

3.如权利要求1或2所述的光学探针，其中，光学活性多肽位于丙酮酸敏感多肽的选自以下的位置中：残基117-121、140-143、160-164、174-176、191-195和/或210-214，

优选地，光学活性多肽位于丙酮酸敏感多肽的选自以下的位点：117/118，117/119，117/120，117/121，118/119，118/120，118/121，119/120，119/121，120/121，140/141，140/142，140/143，141/142，141/143，142/143，160/161，160/162，160/163，160/164，161/162，161/163，161/164，162/163，162/164，163/164，174/175，174/176，175/176，191/192，191/193，191/194，191/195，192/193，192/194，192/195，193/194，193/195，194/195，210/211，210/212，210/213，210/214，211/212，211/213，211/214，212/213，212/214和/或213/214，

优选地，所述丙酮酸敏感多肽包含选自下述一个或多个位点处的突变：Q138，S190，R191，R192，E193，M194，L195。

4.如权利要求3所述的光学探针，其中，光学活性多肽位于丙酮酸敏感多肽的选自以下的位置中：残基117-121、140-143、191-195和210-214。

5.一种核酸序列，选自

(1)编码权利要求1-4中任一项所述的光学探针的多核苷酸；

(2)(1)的片段；

(3)(1)或(2)的互补序列。

6.一种核酸构建物，其包含权利要求5所述的核酸序列，优选地，所述核酸构建物是表达载体。

7.一种宿主细胞，所述宿主细胞

(1)表达权利要求1-4中任一项所述的光学探针；

(2)包含权利要求5所述的核酸序列；或

(3)包含权利要求6所述的核酸构建物。

8.一种制备权利要求1-4中任一项所述的光学探针的方法，包括培养权利要求7所述的宿主细胞，和由培养物分离所述光学探针。

9.权利要求1-4中任一项所述的光学探针、权利要求5所述的核酸序列或权利要求6所述的核酸构建物在检测样品中的丙酮酸或筛选化合物中的应用，优选地，所述检测是丙酮酸定位或定量检测。

10.一种检测试剂盒，其包含

(1)权利要求1-4中任一项所述的光学探针或权利要求8所述方法制备的光学探针；

(2)权利要求5所述的核酸序列；

(3)权利要求6所述的核酸构建物；或

(4)权利要求7所述的细胞；和

任选的利用光学探针检测丙酮酸所需的其他试剂。