[发明专利]一种大弹涂鱼amylin抗菌肽及其编码序列和用途与制备方法

权利要求书

1.一种大弹涂鱼amylin基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种如权利要求1所述的大弹涂鱼amylin基因编码的蛋白，其特征在于，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述的蛋白为大弹涂鱼amylin基因的DNA序列编码的大弹涂鱼amylin抗菌肽的前体蛋白。

3.一种如权利要求2所述的大弹涂鱼amylin基因编码的蛋白C端来源的抗菌肽，其特征在于，所述的抗菌肽多肽由37个氨基酸组成，其全长序列为：KCNTATCVTQRLADFLVRSSNTIGTVYAPTNVGAAAY。

4.一种如权利要求3所述的大弹涂鱼amylin基因编码的蛋白C端来源的抗菌肽的用途，其特征在于，所述的抗菌肽多肽用于制备具有抗菌活性的、能够抑制微生物生长的产品；所述的产品包含用于杀菌的制剂。

5.一种如权利要求3所述的大弹涂鱼amylin基因编码的蛋白C端来源的抗菌肽的制备方法，其特征在于，所述的方法包含：

步骤1，选取并获得大弹涂鱼amylin基因序列；

步骤2，对大弹涂鱼amylin基因进行PCR扩增；

步骤3，选取大弹涂鱼amylin抗菌肽的活性肽段序列；

步骤4，进行多肽合成，获得大弹涂鱼amylin抗菌肽；

步骤5，对获得的抗菌肽进行抗菌活性验证。

6.如权利要求5所述的大弹涂鱼amylin抗菌肽的制备方法，其特征在于，所述的步骤1，通过同源比对，以人的amylin蛋白序列为参考序列，识别出大弹涂鱼amylin基因的核酸序列，其编码序列长度为381bp，编码126个氨基酸。

7.如权利要求5所述的大弹涂鱼amylin抗菌肽的制备方法，其特征在于，所述的步骤2，根据大弹涂鱼amylin基因的部分核酸编码序列分别设计正向引物和反向引物，正向引物的核苷酸序列为：5’-TCTGTTGATTCTTTTACATTGTG-3’，反向引物的核苷酸序列为5’-CGCTCCTTTTGCCGTAC-3’；以其为引物，并以大弹涂鱼脑组织cDNA为模板，进行PCR扩增反应；PCR循环为：94℃预变性5分钟；94℃变性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸30秒，循环35次；72℃再延伸7分钟；PCR扩增产物在1.5％琼脂糖凝胶中电泳鉴定，在300-350bp之间得到明显的目的条带。

8.如权利要求5所述的大弹涂鱼amylin抗菌肽的制备方法，其特征在于，所述的步骤3，根据已验证具有体外抗菌活性的人源hIAPP抗菌肽多肽进行大弹涂鱼amylin潜在抗菌肽活性序列的设计，选取大弹涂鱼amylin蛋白序列中与已知hIAPP抗菌肽相似性最高的第76位到112位氨基酸片段，作为候选的抗菌肽序列。

9.如权利要求5所述的大弹涂鱼amylin抗菌肽的制备方法，其特征在于，所述的步骤4，通过固相合成法，采用标准氨基酸树脂化学合成的方式合成多肽，合成后的多肽使用高效液相色谱进行纯度检测并使用电喷雾电离质谱进行分子量的确定。

10.如权利要求5所述的大弹涂鱼amylin抗菌肽的制备方法，其特征在于，所述的步骤5，首先对所得抗菌肽的抗菌活性进行初筛，再通过生长曲线法检测抗菌肽多肽的最小抑制浓度。