[发明专利]一种抗病除虫增产有机肥的生产方法及应用

权利要求书

1.一种抗病除虫增产有机肥的生产方法，其特征在于，按照以下步骤进行：

(1)预处理：将烟杆和已毁型烟梗末分别破碎，制得60～80目的烟粉；牛粪水分控制在75％以下，并去除粪便中明显的杂质；将废菌包破碎，控制粒径在3cm以内，并去除破碎原料中的塑料膜；

(2)原料按以下重量份数混合：牛粪20-40份、已毁型烟梗末粉末10-30份、腐殖酸20-35份、废菌包10-20份、烟杆粉末15-20份，搅拌充分混合；

(3)复合发酵菌剂的制备：

①复合发酵菌剂各菌株培养基的制备：

PDA培养基：200g马铃薯，加水1000ml煮沸半个小时，纱布过滤，再加10-20g葡萄糖和17-20g琼脂，高压蒸汽(121℃)灭菌20分钟；

LB培养基：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠(NaCl)10g，加去离子水定容至1000mL，pH＝7.0，高压蒸汽(121℃)灭菌21分钟；

MRS培养基：胰蛋白胨10g、牛肉膏粉5g、酵母膏粉4g、葡萄糖20g、吐温-80 1.08g、磷酸氢二钾2g、乙酸钠5g、柠檬酸三铵2g、硫酸镁(MgSO4.7H2O)0.2g、硫酸锰(MnSO4.4H2O)0.05g、琼脂15g、加蒸馏水至1000mL，最终pH 6.2±0.2，高压蒸汽(121℃)灭菌15分钟；

②单菌株的活化和纯化以及液体摇床扩大培养：

米曲霉(Aspergillus oryzae)的活化及培养

将米曲霉(Aspergillus oryzae)接种到PDA培养基上，置于28℃恒温培养箱中，培养至菌丝体丰富或孢子产生；挑取真菌的菌丝体或孢子接种至配制好的真菌液体培养基中液体摇床培养，培养温度为28℃，摇床培养转速为200rpm；

枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)的活化及培养

将枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)接种到LB培养基上划线培养，置于30℃恒温培养箱中培养24-48小时，培养至单菌落产生；挑取中细菌的单菌落接种至配制好的细菌液体培养基中液体摇床培养，培养温度为30℃，摇床培养转速为200rpm；

植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)的活化及培养

将植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)接种于MRS液体培养基中，37℃培养15-20小时，如此传代培养2-3次后得到活化菌种；活化好的菌种接种于MRS液体培养基中，37℃培养12-15h；摇床培养转速为200rpm；

③复合发酵菌剂的混合

按上述方法制取的米曲霉(Aspergillus oryzae)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)的单菌株重量比为3～5：4～6:2～4的比例混合，混合拌匀后制得复合发酵菌剂；

(4)主发酵：按每10吨原料混合物加入1公斤复合发酵菌剂进行配制，控制水分含量52-65％，进行发酵；

(5)翻堆:发酵采用平地堆置，堆成宽为2米、高为1.5米的长垛，长度10-50米；发酵5-7天后，每2-4天用机械翻垛一次，以提供氧气、散热和使物料发酵均匀，发酵中如发现物料过干，应及时在翻堆时喷洒水分，确保顺利发酵，如此经25-40天的发酵达到完全腐熟；

(6)后熟发酵：发酵过程中，堆肥温度上升到60度以上，保持48小时后开始翻堆，当温度超过70度时，立即翻堆，翻堆时务必均匀彻底，将低层物料尽量翻入堆中上部，以便充分腐熟，视物料腐熟程度确定翻堆次数；堆肥在高温阶段45-65℃维持10天，病原菌、虫卵、草籽等均可被杀死；

(7)功能菌剂的制备

培养基：培养基:乳糖21.57g；复合氮源2.6g，其中含蛋白胨与硫酸铵，二者质量比例为1：3；硫酸锰0.21g；磷酸氢二钾1.5g；七水硫酸镁1.2g；加去离子水定容至1000mL，pH＝7.0，高压蒸汽(121℃)灭菌21分钟；

将胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus Krassilnikov)种子接入上述培养基，30℃、170r/min振荡培养24h，以5％(v/v)接种量转入新的培养基中30℃、170r/min振荡培养12h至对数期得到种子液；

(8)功能菌剂的加入：

发酵完成，开始降温时候，加入功能菌剂，功能菌剂按每1吨有机肥兑2公斤的比例加入；

(9)生石灰的加入：

在降温稳定后，加入生石灰，生石灰按每1吨有机肥兑10-50公斤的比例加入；

(10)粉碎、烘干、冷却、检测、计量包装得到成品，制得有机肥料有机质要求达到50％～70％，N、P、K总养分≥5％，粪大肠菌群数呈阴性，蛔虫卵死亡率100％，有效活菌含量为≥2亿/克。

2.根据权利要求1所述的一种抗病除虫增产有机肥的应用，其特征在于：该有机肥用作底肥、基肥穴施，促进马铃薯、辣椒、油麦菜、西红柿、夏黄白、苹果、葡萄、草莓抗病增产方面的应用。