[发明专利]一种载脂蛋白J活性的测定方法

权利要求书

1.一种载脂蛋白J活性的测定方法，其特征在于，向谷胱甘肽S-转移酶(GST)中加入适量的载脂蛋白J，通过测定谷胱甘肽S-转移酶在热处理前、后的比活的变化来计算载脂蛋白J的活性。

2.根据权利要求1所述载脂蛋白J活性的测定方法，其特征在于，包括：S1、取载脂蛋白J和谷胱甘肽S-转移酶按至少3个不同比例混合均匀，补加PB缓冲液至一定体积；S2、升温进行热处理；S3、测定加热前、后的谷胱甘肽S-转移酶的酶活并计算相应的比活；S4、根据测得的谷胱甘肽S-转移酶比活与载脂蛋白J的浓度关系进行拟合，将加热前GST的初始比活的1/2对应载脂蛋白J的浓度定义为1unit/ml，计算载脂蛋白J的比活。

3.根据权利要求2所述载脂蛋白J活性的测定方法，其特征在于，所述热处理的条件为40-80℃加热3-30min。

4.根据权利要求2所述的载脂蛋白J活性的测定方法，其特征在于，步骤S3中谷胱甘肽S-转移酶酶活的测定方法为：

S31、向磷酸缓冲液加入CDNB溶液及GSH溶液，并加水稀释至V₁，配置底物反应液；

S32、将配制好的底物反应液放置进行20-30℃预热；

S33、取待测酶液加到预热的底物反应液中，开始计时，迅速吹打均匀后，取V₂体积的待测液，加到酶标板上的两个孔中，测定反应1min和T分钟(T＞1)后的吸光值，记录数据；

S34、按如下公式计算GST的酶活：GST_酶活(unit/ml)＝ΔA_340差值*10⁶*V_反总*稀释倍数/ε/d/V_样/△T，其中：ΔA_340差值为波长340nm时吸光度净升值；ε为25℃、波长340nm处结合产物的摩尔吸光系数为9600mol^-1*cm^-1*L；V_反总为最终反应体积(L)；V_样为标本体积(ml)；d：酶标板光径约为0.552cm；△T＝(T-1)min。

5.根据权利要求2所述的载脂蛋白J活性的测定方法，其特征在于，GST比活的计算公式为：GST_比活＝GST_酶活/C_pr，其中C_pr为GST的浓度(mg/ml)。

6.根据权利要求2所述的所述的载脂蛋白J活性的测定方法，其特征在于，步骤S4中根据测得的GST比活与载脂蛋白J的浓度关系进行拟合为：以GST比活为y轴，载脂蛋白J的浓度为x轴，进行S型曲线拟合。

7.根据权利要求2所述的所述的载脂蛋白J活性的测定方法，其特征在于，载脂蛋白J的酶活是指按加热前的GST初始比活的1/2即EC50对应的载脂蛋白J的浓度的酶活定义为1unit/ml。

8.权利要求1-7任一项所述的载脂蛋白J活性的测定方法在测定天然/重组载脂蛋白J活性中的运用。