[发明专利]一种新型特异性蛋白检测试剂及其制备方法

说明书

本发明属特异性蛋白检测技术领域，具体涉及一种新型特异性蛋白检测试剂其制备方法。所述特异性蛋白检测试剂包括利用AIE小分子化合物或聚合物直接标记的捕捉蛋白，所述捕捉蛋白与所述特异性蛋白能够相互特异性结合。有益效果在于：试剂制备工艺简单(利用AIE材料直接标记抗体，无需制备纳米粒子环节)；在检测微生物领域，相比于核酸检测试剂，生产环境要求低、感染风险低；检出限低(1ng/mL)，检出准确度高；使用便捷，对操作人员技术要求低；检测迅速(仅需15min)。

技术领域

本发明属特异性蛋白检测技术领域，具体涉及一种新型特异性蛋白检测试 剂及其制备方法。

背景技术

体外诊断(In Vitro Diagnosis，IVD)是指通过血液、体液、组织等生物样本 进行检测而获取诊断信息，进而判断机体疾病或功能。对生物样本的快速、灵 敏和定量检测是目前体外诊断发展的方向。基于免疫层析试纸条的生物医学检 测，因其具有快速、简便、直观、成本低等优势在疾病的早期诊断、预防等方 面产生巨大社会效益和经济效益。免疫层析试纸技术(Immunochromatographic Assay，ICA)是基于抗原-抗体特异免疫学反应和层析反应的原理，标记了抗体 的指示剂会特异性识别与结合如尿样、血样或是唾液等生物样本中的特定待测 物，且在试纸条检测区域滞留与显色，并可结合读数仪进行定量检测，达到快 速、准确地检测待测物的目的。

但是在临床使用的过程中，目前现有的试剂盒检测效果不佳，部分确诊病 人检测了6次核酸试剂都是阴性，对于有的确诊的病人，很多试剂盒的阳性率 只有30％-50％，通过咽试子的办法，还是有很多假阴性的，没有发现核酸， 核酸检测试剂盒核酸检出率低，许多病例要重复多次检测，有的病人咽拭子阴 性但肺细胞灌洗液里有病毒。

诊断新冠肺炎，在分子生物学的手段上，目前常用的办法有两种：一种是 病毒的基因测序，另一种是核酸检测。二代测序因为可以检测微量物质，所以 可以适用的体液类型更多。但是大多数医院没有测序的设备。尤其是二代测序， 不仅仅需要设备，还需要生物信息团队来协助测序结果的解读。但是就算如此， 研发阶段的流程和试剂配比的优化，阳参阴参的设立，以及预临床试验也是需 要的。而且，因为二代测序的成本高检测周期也比较长，不一定适合做这个检 测。

因此，现在的诊断方法以核酸检测(PCR或者real-time PCR)为主，这 主要受制于：试剂盒质量(而非产能)，能够承担临床检测的P3实验室(生物 安全3级实验室)数量，P3实验室设备的准确性和稳定性，能进行熟练稳定 操作的工作人员人数。在实际临床应用的时候，除了高质量的试剂盒以外，样 本的类型，样品的收集运输和储存方法，核酸(RNA)提取方法，检测设备 (PCR仪器或real-time PCR仪)的准确性和稳定性，操作人员的技术，都会 影响到实际的检测效果。除此以外，因为考虑到检测的样品具有高度的传染性， 用于做此检测的实验室理论上应是P3实验室。检测实验室内部需要做严格的 防护，净化负压等等都是最基本的，对于操作流程也有严格的规范。如果实验 室级别达不到，可能存在实验室感染的隐患。

免疫层析试纸技术(Immunochromatographic Assay，ICA)是基于抗原-抗体 特异免疫学反应和层析反应的原理，标记了指示剂的抗体会特异性识别与结合 如尿样、血样或是唾液等生物样本中的特定待测物，且在试纸条检测区域滞留 与显色，并可结合读数仪进行定量检测，达到快速、准确地检测待测物的目的。

现有技术中，通常采用胶体金作为指示剂及有机染料分子的荧光纳米粒子 作为指示剂。胶体金在早孕检测、食品安全、环境、农药残留领域得到了应用。 但是，胶体金的检出准确度和检测灵敏度均较低，因此，只能用于定性或者对 准确度要求不高的定量检测领域。