[发明专利]用于磁驰豫靶向测定癌细胞的磁性纳米微球的制备及应用

权利要求书

1.用于磁驰豫靶向测定癌细胞的磁性纳米微球的制备方法，其特征在于步骤如下：

步骤(1)一步合成法制备超顺磁性Fe₃O₄@PEG-COOH纳米粒子

将乙酰丙酮铁(Fe(acac)₃)和双羧基聚乙二醇(HOOC-PEG-COOH)溶解于2-吡咯烷酮中；向溶液通入氮气以除去氧气，然后在转速为300-400rpm，温度为200-300℃的条件下反应60-90分钟；反应完成后，持续通入氮气直至溶液冷却至常温，然后向溶液加入丙酮-乙醚溶液，得到黑色粘稠沉淀物；将黑色粘稠沉淀物溶解于去离子水中，渗析一段时间以除去分子量小于12000的沉淀物；然后，将沉淀物通过丙酮-乙醚溶液反复沉降，真空干燥，制得超顺磁性Fe₃O₄@PEG-COOH纳米粒子；

步骤(2)碳二亚胺偶联法制备Fe₃O₄@PEG@IgG纳米粒子

将超顺磁性Fe₃O₄@PEG-COOH纳米粒子溶解于双蒸馏水中，分别配置一定浓度的N-羟基磺基琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)、1-乙基-3-[3-二甲基氨基丙基]碳二亚胺盐酸盐(EDC)溶液并加入到混合液中；将溶液置于恒温震荡箱，在转速为300-400rpm，温度为20-30℃的条件下反应20-40min；用碳酸氢钠调节溶液pH值至8.0-9.0，再加入癌细胞抗体，并将溶液置于恒温震荡箱中，在转速为300-400rpm，温度为20-30℃的条件下继续反应1-3h；反应完成后，将Fe₃O₄@PEG@IgG置于离心机中，在转速为7000-9000RCF、温度为2-10℃的条件下离心20-40min；除去上清液，加入适量的双蒸馏水，重复原有条件继续离心20-40min，再除去上清液；将沉淀物分散在0.5％胎牛血清(FBS)/磷酸盐缓冲液(PBS)，即制得Fe₃O₄@PEG@IgG溶液；在使用前，Fe₃O₄@PEG@IgG溶液需保存在4℃的冰箱中。

2.根据权利要求1所述的用于磁驰豫靶向测定癌细胞的磁性纳米微球的制备方法，其特征在于所述磁性纳米微球Fe₃O₄@PEG@IgG纳米粒子以超顺磁性Fe₃O₄为内核，对磁场做出响应；聚乙二醇(PEG)为中间保护层，提供良好的生物相容性；IgG为外壳，用于特异性识别癌细胞。

3.根据权利要求1或2所述的用于磁驰豫靶向测定癌细胞的磁性纳米微球的制备方法，其特征在于步骤(1)双羧基聚乙二醇的分子量为2000。

4.根据权利要求1或2所述的用于磁驰豫靶向测定癌细胞的磁性纳米微球的制备方法，其特征在于步骤(1)双羧基聚乙二醇和乙酰丙酮铁的质量比为(5-7):1。

5.根据权利要求1所述的用于磁驰豫靶向测定癌细胞的磁性纳米微球的制备方法，其特征在于步骤(1)渗析时间为1-4天。

6.根据权利要求4所述的用于磁驰豫靶向测定癌细胞的磁性纳米微球的制备方法，其特征在于步骤(2)癌细胞抗体、超顺磁性Fe₃O₄@PEG-COOH纳米粒子、N-羟基磺基琥珀酰亚胺和1-乙基-3-[3-二甲基氨基丙基]碳二亚胺盐酸盐的质量比为(15-30):(2-10):1:1。

7.根据权利要求6所述的用于磁驰豫靶向测定癌细胞的磁性纳米微球的制备方法，其特征在于步骤(2)丙酮-乙醚溶液的丙酮、乙醚体积比为(1-2):1。