[发明专利]一种细菌检测试剂盒及其应用

说明书

本申请公开一种细菌检测试剂盒，包括磁珠和平衡液，其中，所述平衡液包括葡萄糖、甘露糖、半乳糖和麦芽糖，所述磁珠与所述平衡液的比例为50mg‑100mg:1ml。本申请还提供一种富集细菌的方法。使用本申请的细菌检测试剂盒富集细菌快速，方便，成本低；富集效果明显；避免了反复离心。

技术领域

本申请涉及细菌检测领域，具体地涉及一种细菌检测试剂盒及其应用。

背景技术

临床的样本来源多样，如组织液、血液、脑脊液、胸腹水、尿液、痰液等。每年因临床样本基质复杂、病原体种类复杂、致病菌含量低等给带来的细菌快速检测困难，导致漏诊，治疗不及时造成患者预后不良。对细菌的检测大多数都是通过增殖培养的方式来提高检测灵敏度，但由于有些细菌很难培养，且培养过程中容易导致二次污染，而且非常耗时(24-48h)，大大降低了检测结果的时效性，甚至错过了最佳治疗的时期。虽然使用分子生物学的方法能够较快速的检测标本中致病菌细菌的DNA，但是此方法仍然存在一定的假阴性或假阳性结果干扰诊断。已有的磁珠检测试剂盒成本高，操作不方便，未能广泛的应用于临床。

发明内容

以下是对本文详细描述的主题的概述。本概述并非是为了限制权利要求的保护范围。

针对这些问题，为了解决现有的特殊条件下特殊处理改良磁珠提高其吸附效率的问题。本申请通过将磁珠和样品分别用平衡液处理，然后混合用于富集细菌，富集后无论是荧光染色观察还是直接培养，沉淀菌量都比上清提高。

具体地，本申请提供一种细菌检测试剂盒，包括磁珠和平衡液，所述平衡液包括葡萄糖、甘露糖、半乳糖和麦芽糖，所述磁珠与所述平衡液的比例为50mg-100mg:1ml。

在本申请中，所述磁珠可以为Fe₃O₄纳米磁珠；

所述Fe₃O₄纳米磁珠可以为裸磁珠，或为表面经过硅烷基改性、油酸改性、柠檬酸改性或羧基改性的磁珠，优选地为表面经过硅烷基改性、油酸改性、柠檬酸改性或羧基改性的磁珠。

在本申请中，所述平衡液可以包括10％w/v-20％w/v葡萄糖、5％w/v-10％w/v甘露糖、2％w/v-5％w/v半乳糖和2％w/v-5％w/v麦芽糖。w/v指的是质量体积比，例如，10％指的是10g溶质溶于100ml溶剂里。

在本申请中，所述平衡液可以包括15％w/v-20％w/v葡萄糖、8％w/v-10％w/v甘露糖、4％w/v-5％w/v半乳糖和4％w/v-5％w/v麦芽糖。

在本申请中，所述平衡液还可以包括组胺、鞘氨醇、定菌磷、苯并噻唑、咪唑丙烯酸和谷氨酰胺。

在本申请中，所述平衡液还包括2.5％w/v-5％w/v交联剂；

所述交联剂可以选自糊精、乙烯基三乙氧基硅烷、硼酸和对甲苯磺酸中的任一种或更多种。

在本申请中，溶剂为0.9％医用生理盐水，尽量维持细胞稳定的形态，利于样本的储存。

在本申请中，所述细菌可以选自金黄色葡萄球菌、链球菌、破伤风芽孢杆菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌和伤寒杆菌中的任一种或更多种。

本申请还提供一种富集细菌的方法，所述方法包括：

(1)将磁珠和样品分别用平衡液处理；

(2)将处理后的磁珠与处理后的样品混合，静置；

(3)将步骤(3)获得的混合物放置于磁场中，弃去上清液，收集磁珠沉淀，

其中，步骤(1)中的磁珠和平衡液为前述细菌检测试剂盒中的磁珠和平衡液。