[发明专利]一种嗜酸乳酸菌的选育及其应用

权利要求书

1.一种嗜酸乳杆菌的选育方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)从健壮猪的粪便中分离纯化出原始嗜乳酸杆菌；

(2)利用高氨氮比的固体养猪废水培养基对分离纯化的原始嗜乳酸杆菌进行培养，挑选固体养猪废水培养基上成活的单菌落；

(3)将所得单菌落接种于种子培养基上培养得到种子液，将种子液用无菌生理盐水洗涤重悬，稀释得到菌悬液；

(4)将菌悬液涂布于固体养猪废水培养基上；

(5)选择固体养猪废水培养基上成活的单菌落，分别连续传代培养，培养基仍为固体养猪废水培养基；

(6)筛选出抗逆性强的优势菌株接种于营养培养液，进行发酵培养，获得嗜酸乳杆菌的菌悬液。

2.根据权利要求1所述一种嗜酸乳杆菌的选育方法，其特征在于：步骤(2)的培养环境为37-40℃下活化10-15h；步骤(3)种子培养基按质量比含有葡萄糖1-2％、蛋白胨0.5-1％、牛肉膏0.5-1％、酵母膏0.5-1％、无水乙酸钠0.3-0.5％、柠檬酸二铵0.2-0.3％、磷酸氢二钾0.2-0.3％、七水硫酸镁0.05-0.10％、硫酸锰0.01-0.02％、吐温0.05-0.1％，37-40℃下摇床培养18-24h得到种子液，种子液用无菌生理盐水洗涤重悬，稀释至106-108cfu得到菌悬液。

3.根据权利要求1所述一种嗜酸乳杆菌的选育方法，其特征在于：步骤(5)得到的单菌落，进行50-100次的连续传代培养，挑选生长代谢活性及抗逆性强的优势菌株。

4.根据权利要求1所述一种嗜酸乳杆菌的选育方法，其特征在于：步骤(6)中，采用发酵罐培养，初始发酵液的体积为发酵罐体积的45-55％，向发酵罐中流加糖液或含营养成分的糖液，糖液浓度为40％-60％糖液，营养成按质量百分比含无水乙酸钠0.3-0.5％、柠檬酸二铵0.2-0.3％、磷酸氢二钾0.2-0.3％、七水硫酸镁0.05-0.10％、硫酸锰0.01-0.02％、番茄汁0.5-0.6％。

5.根据权利要求4所述一种嗜酸乳杆菌的选育方法，其特征在于：步骤(3)中，发酵过程中控制培养基的流速，使发酵罐中培养液的总糖浓度维持在1-2wt％。

6.根据权利要求5所述一种嗜酸乳杆菌的选育方法，其特征在于：步骤(6)中，采用的营养培养液中按质量比包括葡萄糖1-2％、蛋白胨0.5-1％、牛肉膏0.5-1％、酵母膏0.5-1％、无水乙酸钠0.3-0.5％、柠檬酸二铵0.2-0.3％、磷酸氢二钾0.2-0.3％、七水硫酸镁0.05-0.10％、硫酸锰0.01-0.02％、吐温0.05-0.1％，发酵温度为37-40℃，发酵培养时间为24-30h。

7.根据权利要求6所述一种嗜酸乳杆菌的选育方法，其特征在于：步骤(3)中，向发酵罐中通入氮气，通气比为0.1-0.2vvm，搅拌转速为50-60r/min，罐压维持在0.03-0.05MPa。

8.根据权利要求1-7任一项所述一种嗜酸乳杆菌的选育方法，其特征在于：所述嗜酸乳杆菌Lactobacillus acidophilus已于2016年3月23日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号CCTCC NO:CCTCC M 2016139。

9.一种高氨氮比固体养猪废水培养基的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

将养猪废水进行过滤，旋转蒸干浓缩，添加0.5％-0.8％(w/v)的猪胆盐，用氢离子浓度为6-8mol/L的酸液调节pH至2.0-3.5，于115-130℃下反应30-90min，得到高氨氮比的养猪废水液，加入1-2％(w/v)的琼脂糖制成固体养猪废水培养基。

10.一种利用嗜酸乳酸杆菌饲养猪的方法，其特征在于：将嗜酸乳杆菌的菌悬液用于饲料添加或者餐后直接喂养猪。