[发明专利]结核分枝杆菌H37Rv基因及编码蛋白和其应用

说明书

本发明涉及一种结核分枝杆菌H37Rv新编码基因Rv3350(‑|3760359‑3761516|)及其编码蛋白。Rv3350所编码蛋白部分或者全部具有B细胞抗原性，可单独或者联合用于肺结核患者的临床快速筛查和保护人体免受结核分枝杆菌感染。

技术领域

本发明涉及抗原抗体检测领域，具体涉及结核分枝杆菌基因和其应用。

背景技术

结核病是一个全球性的重大公共卫生问题，结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis，MTB)是引起人类结核病的病原菌。据WHO最新发布的2019年全球结核病报告数据显示，2018年新增约1000万新发活动性肺结核患者，结核病仍然是感染性疾病中的头号杀手。除了活跃的结核病患者外，世界上约有1/4 人口感染了MTB，面临着进一步发展为活动性结核病的风险。故建立快速、准确、特异、敏感、廉价的结核病检测和结核分枝杆菌鉴别方法，是有效治疗、控制结核病蔓延的必要前提。

目前结核病的诊断主要依赖1)痰液细菌学检查及胸片影像学检查，但是存在敏感性低或耗时长的缺点；2)免疫学诊断法，但因与BCG疫苗或其它环境分枝杆菌产生交叉免疫反应，从而导致了高假阳性的产生，尤其是BCG疫苗接种区尤为明显。至今国内外已有多个类似于T-SPOT.TB的试剂盒或依托蛋白质芯片免疫诊断辅助技术的试剂盒，但均由于缺乏可鉴别结核分枝杆菌有效特异性新抗原这一核心难题，难于解决“阳性不能确证，阴性难于排除”的难题。因此结核分枝杆菌特异性高效抗原的开发是业界亟待解决的核心难题，任何进步都将为结核病临床诊断技术的发展和试剂盒的研制提供原始创新性成果和技术支撑。

发明内容

本发明的目的是提供一种结核分枝杆菌H37Rv漏注释基因 Rv3350(-|3760359-3761516|)。

本发明的第二个目的是提供上述基因编码的蛋白产物。

本发明的第三个目的是提供一种结核分枝杆菌IgG抗体检测抗原。

本发明的第四个目的是提供一种结核分枝杆菌检测试剂。

本发明的第五个目的是提供一种结核分枝杆菌抗原。

本发明的第六个目的是提供上述结核分枝杆菌IgG抗体检测抗原和结核分枝杆菌抗原的应用。

根据本发明的一方面，一种分离的核苷酸，为结核分枝杆菌H37Rv编码基因Rv3350(-|3760359-3761516|)，所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

通过精准蛋白质基因组学技术，鉴定到其编码基因表达产物的一条高质量肽段“VDDLIEHGLGR”(图1)。通过人工合成该肽段，液相色谱-质谱联用分析，原始谱图与合成肽段谱图基本一致(图2)，验证了蛋白质基因组学发现新肽段正确。据此确定了新基因Rv3350(-|3760359-3761516|)在染色体上的位置，其所编码蛋白经NCBI-BLASTP后，数据库中没有比对到任何序列，属于功能未知新基因编码蛋白。

Bepipred Linear Epitope Prediction(BLEP，v2.0)、BioSun和Dlbepitope软件分别预测到10、23和4个高分值B细胞表位，其中至少两种预测软件预测为可信的B细胞表位，覆盖了整个蛋白质序列的28.57％(表1)，意味着其可能具有B细胞抗原性，其蛋白序列如SEQ ID NO.2所示。

表1.Rv3350理论预测的高可信表位

根据本发明的又一方面，一种Rv3350编码蛋白，由上述结核分枝杆菌H37Rv 编码基因Rv3350(-|3760359-3761516|)编码，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。