[发明专利]一种黑麦4RS染色体臂特异KASP分子标记及其应用有效
| 申请号： | 202010107622.X | 申请日： | 2020-02-21 |
| 公开（公告）号： | CN111235292B | 公开（公告）日： | 2022-09-27 |
| 发明（设计）人： | 马朋涛;宋建成;杜文晓;王文瑞;贾梦淑;张旭;梁萧;武莉茹 | 申请（专利权）人： | 烟台大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 石家庄国域专利商标事务所有限公司 13112 | 代理人： | 苏艳肃 |
| 地址： | 264005 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 黑麦 rs 染色体 特异 kasp 分子 标记 及其 应用 | ||
1.一种黑麦4RS染色体臂特异KASP分子标记的引物，其特征在于，所述KASP分子标记为YTU4RS，KASP分子标记YTU4RS的引物包括黑麦等位型上游引物YTU4RS-F、小麦等位型上游引物YTU4RS-H和共用下游引物YTU4RS-C；
所述黑麦等位型上游引物YTU4RS-F的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；
所述小麦等位型上游引物YTU4RS-H的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；
所述共用下游引物YTU4RS-C的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。
2.一种权利要求1所述的黑麦4RS染色体臂特异KASP分子标记的引物在进行小麦-黑麦染色体工程育种和分子标记辅助选择育种中的应用。
3.一种权利要求1所述的黑麦4RS染色体臂特异KASP分子标记的引物在鉴定小麦-黑麦后代材料中是否携带黑麦4RS染色体臂的应用。
4.一种小麦-黑麦后代材料中是否携带黑麦4RS染色体臂的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）提取待测样品的DNA，作为模板；
（2）利用所述KASP分子标记YTU4RS的引物对待测样品的基因组DNA进行PCR扩增，获得扩增产物；
所述KASP分子标记YTU4RS的引物包括黑麦等位型上游引物YTU4RS-F、小麦等位型上游引物YTU4RS-H和共用下游引物YTU4RS-C；所述黑麦等位型上游引物YTU4RS-F的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述小麦等位型上游引物YTU4RS-H的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；所述共用下游引物YTU4RS-C的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；
（3）采用荧光定量PCR检测仪分析PCR扩增产物基因型；37℃测量荧光信号，Bio-RadCFX Manager 3.1读取分型结果。
5.根据权利要求4所述的小麦-黑麦后代材料中是否携带黑麦4RS染色体臂的鉴定方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系为：20ng/μL DNA 6.0μL，2×KASP Maseter Mix10.0μL，引物混合液0.24μL，ddH2O 3.76μL，总体系为20.0μL；其引物混合液中所述黑麦等位型上游引物YTU4RS-F和小麦等位型上游引物YTU4RS-H的浓度均为12μM；共用下游引物YTU4RS-C的浓度为30μM。
6.根据权利要求4或5所述的小麦-黑麦后代材料中是否携带黑麦4RS染色体臂的鉴定方法，其特征在于，所述PCR扩增的程序为：94℃预变性15分钟；94℃变性20秒， 64℃梯度退火并延伸60秒，10个循环，每个循环退火及延伸的温度降低0.6℃；94℃变性20秒， 58℃退火并延伸60秒，38个循环。
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