[发明专利]一种高存活率的石斑鱼类精子冷冻液配方

说明书

本发明提供一种高存活率的石斑鱼类精子冷冻液配方，该配方包括以下成分：26～30g葡萄糖、5～8g NaCl、0.2～0.3g NaHCO₃、0.14～0.18g KCl、0.11～0.13g CaCl₂·2H₂O、0.01～0.02g NaH₂PO₄、0.1～0.2g MgCl₂·6H₂O、0.05～0.08g甘氨酸和0.11～0.15g斜生栅藻提取物。采用本发明冷冻液，石斑鱼精子活率达到83％以上，最高达92％，与鲜精相当；精子平均直线运动速度为44um/s以上，最高达65um/s，与鲜精相当。本发明冷冻液不仅调节精子细胞渗透压和pH，避免了冷冻过程中的结晶和精子收缩，而且进一步对精子细胞膜起到保护作用，对石斑鱼精子具有显著的保存效果。

技术领域

本发明涉及低温冷冻生物学领域，特别涉及一种高存活率的石斑鱼类精子冷冻液配方。

背景技术

在石斑鱼人工繁殖过程中，常常遇到雌雄亲鱼性腺发育不同步，导致成熟卵子无精子授精的情况，因此，研究石斑鱼精子的冻存技术在石斑鱼养殖过程中具有重要的意义。精液冷冻保存的原理是精子在一定抗冻剂的保护下于低温保存，精子活动被抑制，能量消耗减少，一旦恢复到适宜环境中，精子就可恢复活力。目前鱼类常见的冷冻液是以MPRS或ELRS3作稀释液，稀释液中加DMSO制成冷冻液。然而由于不同鱼类精子细胞的细胞液、渗透压、pH等生理特性不同，因此，不同鱼类精液对冷冻液的要求不同。经试验发现目前的MPRS或ELRS3配方不适用于石斑鱼，其对石斑鱼的冷冻保存效果有限。因此，研究一种专门适用于石斑鱼的精子冷冻液配方是目前亟需解决的问题。

发明内容

鉴以此鉴于现有技术的不足，本发明提供一种高存活率的石斑鱼类精子冷冻液配方。

本发明的技术方案是：

一种高存活率的石斑鱼类精子冷冻液配方，每升精子冷冻液中包括以下成分：26～30g葡萄糖、5～8g NaCl、0.2～0.3g NaHCO₃、0.14～0.18g KCl、0.11～0.13g CaCl₂·2H₂O、0.01～0.02g NaH₂PO₄、0.1～0.2g MgCl₂·6H₂O、0.05～0.08g甘氨酸和0.11～0.15g斜生栅藻提取物。

优选的，每升精子冷冻液中包括以下成分：28g葡萄糖、7g NaCl、0.2g NaHCO₃、0.16g KCl、0.12g CaCl₂·2H₂O、0.01g NaH₂PO₄、0.1g MgCl₂·6H₂O、0.06g甘氨酸和0.13g斜生栅藻提取物。

本发明所述斜生栅藻提取物为：

挑取藻细胞，接种至培养基中，初始藻液OD₆₀₀＝0.2，于温度25℃，光照2500lx，光周期14：10(L/D)条件下震荡培养3天；取藻液于5000rpm离心5min，弃上清，取沉淀加pH7.2磷酸盐缓冲液补齐体积，然后于90℃加热30min，8000rpm离心，取上清过滤，滤液减压干燥至提及减少80％，冷藏备用。优选的，所述培养基为：硝酸钠0.25g/L，磷酸二氢钾0.120g/L，磷酸二氢钾0.10g/L，氯化钙0.025g/L，氯化钠0.022g/L，硫酸镁0.025g/L，硫酸锌0.20mg/L，三氯化铁0.008g/L，氯化锰1.2mg/L，钼酸钠0.2mg/L，硫酸铜0.1mg/L，余量是水。

本发明所述冷冻液配方用于冷冻龙胆石斑鱼精液，可明显保持精子活力。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：