[发明专利]一种肝纤维化抗体蛋白芯片的制备以及在诊断纤维化分期中的应用

说明书

本发明公开了肝纤维化抗体蛋白芯片的制备以及在诊断纤维化分期中的应用，包括不同病因肝纤维化患者血清生物标志物的样本库建立、敏感度和特异度较高的生物标志物筛选、肝组织活检分期的抗体蛋白芯片制备以及肝纤维化标志物蛋白抗体芯片检测系统、应用于医学研究和临床医学领域。采用本发明只需采取患者的外周血就可以快速高效的检测出肝纤维化的病因，降低了检测成本并且缩短了检测时间，减少了肝脏病变活检的需要，降低了取样难度并且减轻了因取样给患者带来的痛苦。

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别是涉及一种肝纤维化抗体蛋白芯片的制备以及在诊断纤维化分期中的应用。

背景技术

肝纤维化是多种慢性肝病共同归宿，活检是公认的临床诊断“金标准”。但由于其有创性以及相关并发症，血清学标志物的检测更具吸引力。目前已发现多种肝纤维化的生物标志物以及预测模型，然而各种单一的生物标志物和联合评分系统对不同病因导致的纤维化有偏向，同时敏感度和特异度各有优劣，为临床工作增加困难。因此，建立不同病因肝纤维化患者血液生物标志物的样本库，筛选出敏感度特异度较高的生物标志物，制备具有商业化潜能的抗体蛋白芯片，并能对应肝组织活检分期，将减少患者痛苦，更好地指导临床医师合理诊治肝纤维化，同时为肝纤维化的研究提供更多数据与资源。

肝纤维化诊断及治疗共识(2019年)共识与指南中推荐临床上肝纤维化的病理学诊断采用Scheuer评分系统：Scheuer评分系统将肝纤维化分为0～4期。0期-无纤维化；1期-门管区扩大；2期-门管区纤维化，纤维间隔形成；3期-纤维间隔伴小叶结构紊乱；4期-可能或肯定肝硬化

抗体芯片技术作为一种通量化的蛋白质分析技术，已经用于疾病蛋白质组的研究，并能够较全面和准确地反映出在疾病发生发展过程中的蛋白质表达水平的变化。

目前无大规模不同病因肝纤维化患者血清样本库，尚缺乏血清特异性肝纤维化诊断指标，同时单一血液指标对肝纤维化评估作用有限。并且无血清标志物模型对应肝组织活检分期。

发明内容

本发明的目的在于建立不同病因肝纤维化患者血清生物标志物的样本库，其特点在于能够全面的反应各种肝纤维化患者的血清标志物。

本发明的另一目的是利用筛选的敏感度、特异度较高的生物标志物制备出检测肝纤维化抗体蛋白芯片。其特点是能够快速高效的显示肝纤维化原因。

本发明还有一目的是利用肝纤维化抗体蛋白芯片的结果建立评分(Scheuer)系统对肝组织活检进行分期。

本发明是通过以下技术方案实现的。

1.建立不同病因肝纤维化患者血清生物标志物的样本库

在全国各省市有代表性的多家医院，患者知情同意，医院伦理审查通过的前提下，收集三年内肝脏穿刺活检并确诊为肝纤维化患者以及100例健康志愿者(肝功正常、肝炎病毒阴性、肝脏影像学无异常)的血液样本，建立样本库。根据临床资料和诊疗经过尽可能将患者分为慢性乙型肝炎(CHB)、慢性丙型肝炎(CHC)、酒精性肝病(ALD)、非酒精性脂肪肝(NAFLD)、肝硬化(LC)。同时将入组患者和健康志愿者的全部医疗信息进行网络登记，统一管理。

2.筛选出敏感度特异度较高的生物标志物