[发明专利]一种膀胱癌基因扩增的FISH检测方法、探针及试剂盒

说明书

本发明公开一种膀胱癌基因扩增的FISH检测方法、探针及试剂盒，用于检测膀胱癌相关FRS2基因(NCBI Gene ID:10818)扩增的一组双色FISH探针为(1)标记为红色的FRS2基因探针，(2)标记为绿色的12号染色体中心粒探针。本发明的膀胱癌相关FRS2基因扩增的FISH检测方法通过对尿脱落细胞及膀胱癌组织石蜡切片进行常规预处理后，采用一组双色FISH探针进行原位杂交，根据检测到的荧光信号判断膀胱癌相关FRS2基因的扩增情况。本发明操作简单、特异性和敏感性高，可以快速、直观地检测出膀胱癌相关FRS2基因的扩增状态，准确可靠，从而辅助膀胱癌患者进行尿液早期无创诊断及术后复发预测及检测等方面临床应用。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，尤其涉及一种膀胱癌基因扩增的FISH 检测方法、探针及试剂盒。

背景技术

膀胱癌是泌尿系统常见恶性肿瘤。目前，临床上膀胱癌诊断方法涉及膀胱镜检查、尿常规检查、尿脱落细胞学分析、尿肿瘤标记物检查、腹部和盆腔B超等。尿膀胱癌标志物的研究为无创诊断膀胱癌提供了多种检测指标，美国食品药品监督管理局已经批准将BTAstat、NMP22、尿荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization，FISH)等用于膀胱癌的辅助诊断。已有研究显示FISH技术具有较高的敏感性和特异性。目前，临床上主要通过FISH检测3、7、17号染色体非整倍体以及p16基因扩增情况辅助诊断膀胱癌。随着肿瘤基因组学研究的深入，一系列基于FISH技术开发的基因检测方法在肿瘤诊断与治疗领域发挥着重要作用。最新的膀胱癌组学研究揭示膀胱癌中FRS2(成纤维细胞生长因子受体底物2)基因存在特异性拷贝数扩增，且突变频率高。因此，通过FISH方法检测FRS2扩增情况可作为辅助诊断膀胱癌的一项重要指标。

FRS2是一种衔接蛋白，能与细胞生长调控相关的多种受体结合，介导其下游信号通路的激活过程，从而发挥重要生物学功能。经研究揭示FRS2 拷贝数扩增导致其编码蛋白在肿瘤组织中高表达，且关联不良预后。因此通过FISH检测FRS2扩增情况可作为膀胱癌病理学诊断的重要靶分子。

发明内容

鉴于上述检测FRS2扩增在膀胱癌诊疗中的重要意义及其目前尚缺乏操作简便、结果稳定直观的检测方法，本发明的目的在于提供一种基于FISH 技术的FRS2基因扩增检测方法，用于尿液无创诊断膀胱癌及膀胱癌术后复发监测。

本发明的技术方案如下：

用于检测膀胱癌相关FRS2基因扩增的一组双色FISH探针，其中，所述一组双色FISH探针为(1)标记为红色的FRS2基因探针，(2)标记为绿色的12号染色体中心粒探针。其中FRS2：NCBI Gene ID:10818；序列参考：NC_000012.12；网址：https://www.ncbi.nlm.nih.gov。进一步地，利用切口平移法制作所述标记为红色的FRS2基因探针，利用PCR法制作所述标记为绿色的12号染色体中心粒探针。

一种用于检测膀胱癌相关FRS2基因扩增的FISH检测试剂盒，其中，所述FISH检测试剂盒包括一组双色FISH探针，所述一组双色FISH探针为 (1)标记为红色的FRS2基因探针，(2)标记为绿色的12号染色体中心粒探针。

一种膀胱癌相关FRS2基因扩增的FISH检测方法，其中，所述FISH检测方法包括：对尿脱落细胞及膀胱癌组织石蜡切片进行预处理后，采用一组双色FISH探针进行原位杂交，根据检测到的荧光信号判断是否存在膀胱癌相关FRS2基因的扩增；其中所述一组双色FISH探针为(1)标记为红色的FRS2基因探针，(2)标记为绿色的12号染色体中心粒探针。