[发明专利]一种特异性纳米抗体Nb2F7及其应用

说明书

本发明公开了一种特异性纳米抗体Nb2F7及其应用。本发明提供了一种特异性纳米抗体Nb2F7，所述纳米抗体Nb2F7的VHH的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。该纳米抗体Nb2F7能够特异性识别19‑NT，且具有优异的有机溶剂耐受性，不会受到在实际样品检测前处理过程中加入的有机溶剂的影响，检测结果准确度高，对19‑NT的检测范围为0.34ng/mL～8.32ng/mL，IC50为1.14ng/mL，最低检测限为0.16ng/mL，检测灵敏度高，且操作简单、所耗时间较短；另外，该纳米抗体Nb2F7的制备方法简单，具有普遍适用性；因此，该纳米抗体Nb2F7在检测19‑去甲睾酮、制备19‑去甲睾酮检测试剂/试剂盒中具有广泛的应用前景。

技术领域

本发明属于生物技术领域。更具体地，涉及一种特异性纳米抗体Nb2F7及其应用。

背景技术

19-去甲睾酮(19-nortestosterone，19-NT)简称诺龙，是睾酮甾环结构上脱去第19位碳原子而形成的内源性和外源性蛋白同化激素，其具有很强的促蛋白质合成能力，能参与生长发育的生理调节，促进骨骼和肌肉的生长，减少脂肪贮积。因此，许多国家和地区将19-NT用作畜禽生长促进剂，以改善生产性能，提高饲料报酬。临床主要用于治疗贫血老年性骨质疏松，还能促进人体肌肉的生长发育，增加训练耐力和训练负荷，运动员服用19-NT后，能增强肌肉力量，结合适度的锻炼和饮食，可提高比赛成绩。

但研究表明，19-NT及其代谢物残留可影响人的肝脏功能，损害心血管系统，还可造成生殖器官受损、肾上腺萎缩、情绪失控及内分泌失调等毒副作用。这就要求对食源性动物生产进行严格的激素滥用监测，以保护消费者的身心健康。因此，亟需一种快速、灵敏、高效的检测方法来实现对19-NT的快速检测。

现有常见的检测19-NT的方法有：薄层色谱法、气相色谱法(简称GC)、高效液相色谱法(简称HPLC)、气相色谱-质谱法、液相色谱质谱联用法以及其他定量检测方法。但这些方法需要专业的技术人员、繁琐的样品前处理过程和昂贵的仪器设备，不适合大批量市场检测和现场监控。而免疫学检测技术灵敏度高、特异性强、操作简单、价格低廉，能够实现对生物液体的小体积、大通量检测，逐渐成为有毒有害残留物检测的替代方法。

目前，19-NT残留分析一般使用气相色谱法、高效液相色谱法及色谱质谱联用技术，这些方法灵敏、准确，但样品前处理复杂、繁琐费时，且需要昂贵的仪器设备和专业的操作人员，检测成本高，难以满足样品现场、批量、快速检测的需要。因此，开发一种简单快速、适用于兽药残留现场监控的分析方法具有重要意义。而基于抗体(单克隆抗体和多克隆抗体)建立的免疫分析方法，虽然具有快速、灵敏、高通量的优势，但是在极端条件下抗体往往稳定性差，容易失活，且在实际样品检测前，对样品的前处理过程需要用到有机溶剂，而有机溶剂的残留使得以单克隆抗体和多克隆抗体为主的免疫学检测的灵敏度、准确度大大降低。因此，研发一种稳定性好、准确度高、灵敏度强的快速检测19-NT的方法，具有重要意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是为了克服上述现有技术的不足，提供一种19-NT特异性纳米抗体Nb2F7及其应用。

本发明的目的是提供一种特异性纳米抗体Nb2F7。

本发明另一目的是提供一种编码所述纳米抗体Nb2F7的基因。

本发明又一目的是提供一种特异性纳米抗体Nb2F7表达载体。

本发明又一目的是提供一种重组细胞。

本发明又一目的是提供所述纳米抗体Nb2F7、所述基因、所述表达载体或所述重组细胞在检测19-去甲睾酮中的应用。

本发明又一目的是提供所述纳米抗体Nb2F7、所述基因、所述表达载体或所述重组细胞在制备19-去甲睾酮检测试剂/试剂盒中的应用。

本发明再一目的是提供一种检测19-去甲睾酮的方法。