[发明专利]一种支持HEK293细胞悬浮培养的无血清无蛋白培养基及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种支持HEK293细胞悬浮培养的无血清无蛋白培养基，包括氨基酸、微量元素、维生素、脂类物质、无机盐，其特征在于：所述无血清无蛋白培养基中还包括抗结团物质和添加剂；所述抗结团物质的组成为：葡聚糖硫酸钠25~150mg/L，柠檬酸铁铵5~15mg/L；所述添加剂的组成为：腐胺0.1~1mg/L，胸腺嘧啶0.6~2.4mg/L，抗坏血酸磷酸酯镁1~5mg/L，乙醇胺1.5~12.5mg/L，金精三羧酸1~10mg/L，次黄嘌呤1~10mg/L，甲基-β-环糊精25~100mg/L，甜菜碱500~1000mg/L，牛磺酸60~180mg/L，海藻糖75~150mg/L，果糖500~1500mg/L，D-葡萄糖4000~8000mg/L，酵母水解物1000~3000mg/L，棉籽水解物1000~3000mg/L，Kolliphor p1883000~6000mg/L；

所述支持HEK293细胞悬浮培养的无血清无蛋白培养基中还包括3-甲基腺嘌呤，在细胞浓度达到峰值后一天加入3-甲基腺嘌呤至终浓度为8~12mmol/L；

所述支持HEK293细胞悬浮培养的无血清无蛋白培养基用于TGF-β1基因的表达。

2.根据权利要求1所述的无血清无蛋白培养基，其特征在于：所述抗结团物质的组成为：葡聚糖硫酸钠50~120mg/L，柠檬酸铁铵8~12mg/L。

3.根据权利要求1所述的无血清无蛋白培养基，其特征在于：所述添加剂的组成为：腐胺0.3~0.4mg/L，胸腺嘧啶1.0~1.5mg/L，抗坏血酸磷酸酯镁2~3mg/L，乙醇胺4~6mg/L，金精三羧酸2~3mg/L，次黄嘌呤6.0~7.5mg/L，甲基-β-环糊精45~55mg/L，甜菜碱650~750mg/L，牛磺酸100~150mg/L，海藻糖90~110mg/L，果糖950~1050mg/L，D-葡萄糖5500~6500mg/L，酵母水解物1800~2200mg/L，棉籽水解物1800~2200mg/L，Kolliphor p188 4500~5500mg/L。

4.根据权利要求1所述的无血清无蛋白培养基，其特征在于：所述氨基酸的组成为：L-组氨酸盐酸盐一水合物50~150mg/L，L-异亮氨酸100~200mg/L，L-亮氨酸150~200mg/L，L-赖氨酸250~300mg/L，L-蛋氨酸25~100mg/L，L-苯丙氨酸50~150mg/L，L-苏氨酸100~200mg/L，L-色氨酸25~75mg/L，L-缬氨酸100~200mg/L，甘氨酸25~75mg/L，L-丙氨酸6~25mg/L，L-谷氨酰胺1000~2000mg/L，L-精氨酸盐酸盐200~600mg/L，L-天(门)冬酰胺150~300mg/L，L-天冬氨酸20~60mg/L，L-半胱氨酸盐酸盐一水合物25~75mg/L，L-胱氨酸盐酸盐40~100mg/L，L-谷氨酸10~30mg/L，L-脯氨酸55~165mg/L，L-丝氨酸50~150mg/L，L-酪氨酸二钠盐二水合物100~200mg/L。

5.根据权利要求1所述的无血清无蛋白培养基，其特征在于：所述微量元素的组成为：偏钒酸铵0.0001~0.1mg/L，亚硒酸钠0.01~0.25mg/L，四水氯化亚锰0.1~0.5mg/L，五水硫酸铜0.1~0.6mg/L，氯化锌0.2~1.0mg/L。

6.根据权利要求1所述的无血清无蛋白培养基，其特征在于：所述维生素的组成为：维生素H 0.01~1mg/L，叶酸5~20mg/L，维生素B2 0.1~1mg/L，硫辛酸0.1~1mg/L，维生素B120.5~4mg/L，i-肌醇20~60mg/L，维生素B6 2~10mg/L，维生素B1 2~10mg/L，维生素C 2.5~10mg/L，维生素E 1~10mg/L，D-泛酸钙 1~10mg/L，烟酰胺1~10mg/L，氯化胆碱20~60mg/L。